八联排管差速离心法
许多具有生物活性的生物大分子和亚细胞器不稳定,需要低温高速离心。常用的方法是差速离心。离心后,弃去上清,分离沉淀,将分离出的上清以增加的速度离心以分离沉淀的第二部分。这样,速度不断提高,需要的物质一步步分离出来。使用这种方法可以有效地分离出尺寸差异较大的颗粒,但无法分离出相同尺寸的颗粒,而且单个成分往往不均匀,与其他类型的颗粒混合。
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八联排管差速离心法
许多具有生物活性的生物大分子和亚细胞器不稳定,需要低温高速离心。常用的方法是差速离心。离心后,弃去上清,分离沉淀,将分离出的上清以增加的速度离心以分离沉淀的第二部分。这样,速度不断提高,需要的物质一步步分离出来。使用这种方法可以有效地分离出尺寸差异较大的颗粒,但无法分离出相同尺寸的颗粒,而且单个成分往往不均匀,与其他类型的颗粒混合。
八联排管等压区域离心法
将待分离颗粒的悬浮液置于密度梯度溶液中或实际将颗粒溶解在梯度溶液中。离心后,这些颗粒要么漂浮,要么下降,达到与自身密度相同的液体。他们在这里没有重量。无论它们离心多久,它们都不会移动。这些粒子可以变成一系列区域,每个区域都在自己的密度区域中。因此,它是一种利用浮动密度粒度来分离粒度的技术。使用的介质通常是氯化铯 (Cscl) 和硫酸铯 (Cs2SO4)。前者适用于DNA提取,后者适用于RNA提取。
八联排管负压法
1、正确连接负压装置,将96孔DNA制备板放在负压装置上;在PCR,酶消化,酶标记或测序反应溶液中加入3倍缓冲液PCR-A(如果缓冲液PCR-A小于100μl,加入100μl);充分混合并转移至96孔DNA制备板,打开并调节负压至-25-30英寸柱,并缓慢吸出板中的溶液。
2、加入0.3 ml缓冲液W2并吸收溶液。用相同的方法用0.3ml缓冲液W2洗涤两次。确认在试剂瓶上的体积的缓冲液W2浓缩物中加入无水乙醇。
3、维持负压并提取96孔DNA制备板10分钟。
4、在长纤维组织上将96孔DNA制备板粉碎6次,引流管朝下。
5、将96孔DNA制备板置于96孔V形板上,加入25-30ul水或洗脱至膜中心,在室温下静置1分钟。通过以3 000×g离心5分钟洗脱DNA。
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