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抗l体的层析分离步骤基本

都可以采用标准化的三步曲：步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余DNA，Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，Protein A使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。

离子交换层析中,为什么用氯离子洗脱阴离子

阴离子交换柱的填料是正电填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质（如DNA）.这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子（一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠）洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.

阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.

五大类层析技术

-凝胶过滤(GF)

-离子交换(IEX)

-亲和层析(AC)

-疏水层析(HIC)

-反相层析(RPC)

基架–颗粒越细、大小越均匀，分辨率越高，但反压亦较高(SOURCE基架例外)

物理稳定性–新一代介质较坚固，能承受高流速，同时保持柱床体积和结构稳定，省却每次重新装柱,提高重复性化学稳定性-新一代介质能承受pH，高盐度，促溶剂和，利于开发分离条件和在位清洗(CIP)，大大延长介质寿命并提高重复性

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