PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变基因(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此基因插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤组织,在不含激
逆转录病毒滴度测定
PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变基因(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此基因插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤组织,在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源基因导入到了HE89的原生质体中,建立了植株再生的转化体系。
PEG法虽然转化效率较高,但必须以裸1露的原生质体为受体,而且还受到基因型的限制。

腺病毒是无胞膜的线性双链DNA病毒,目前腺病毒科分为5个属,有多种型别的腺病毒已经被开发为基因转移载体,在基础科研、基因cure和载体疫1苗领域得到广泛应用。
腺病毒的基因组长约26-46kb,这使得腺病毒载体的构建与常见质粒载体(一般长度小于10kb)不同。太长的基因组使得在腺病毒载体上富集一个多克1隆位点非常困难。针对重组腺病毒的构建,开发了多种方法。
目前已有的腺病毒载体系统均存在缺陷,有些构建步骤繁琐,耗时较长,有些在重组病毒中引入了不必要的外源序列,有些不能用于重组腺病毒的反向遗传改造。近年来,新的生物特性不同的腺病毒不断被发现,因此,本领域对构建过程更加快捷简便的、人工改造更加方便灵活的腺病毒载体系统和重组病毒构建方法存在需求。
位点特异性重组法
这类方法使用来源于噬菌体的重组酶,这类重组酶能够识别特异性序列位点(长度数十碱基对至数百碱基对)并引发含有该位点的序列之间的重组;在腺病毒骨架和穿梭质粒中添加重组酶能够识别的特异性位点,在细胞内表达对应的噬菌体重组酶或体外使用重组酶,介导骨架质粒和穿梭质粒之间的位点特异性重组,将目的基因引入骨架质粒,形成带有重组腺病毒基因组的腺病毒质粒;转染包装细胞,进行病毒载体拯救。该方法进一步简化了腺病毒质粒的制备过程,它的缺限是在腺病毒基因组的某些部位不可避免的残留了重组酶特异性识别位点。
PCR核酸检测实验室布局建设
核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)
1、穿戴流程:在基因扩增实验室的清洁区(更衣区)或者普通实验室的洁净区,工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医1用N95口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套,进入样本处理工作区域或实验室。
2、要点提示:
2.1、具备标准基因扩增布局条件的实验室,应在清洁更衣区做好个人三级防护,条件有限的实验室亦可选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。
2.2、需佩戴医1用N95口罩,若无医1用N95口罩,可以考虑用普通N95/KN95口罩外加一次性外1科口罩的组合方式,但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。
2.3、佩戴N95口罩时需检查密闭性,通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。
2.4、一次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求,有条件时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣,穿衣时需由他人协助。
2.5、穿戴整齐的工作人员,应按要求尽快进入样本处理的实验区域开展工作,严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。
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