Arf样蛋白1(Arl1)是GTpases的Ras超家族中的调控性GTPases Arf家族的成员,并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。 Arl1在主要序列,细胞定位和功能(膜运输调节)上与Arf1-6较相似,甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中,还有报道表明
Ras antibody
Arf样蛋白1(Arl1)是GTpases的Ras超家族中的调控性GTPases Arf家族的成员,并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。 Arl1在主要序列,细胞定位和功能(膜运输调节)上与Arf1-6较相似,甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中,还有报道表明Arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
Arf6激l活测定。 经GDP(lane1)或GTPγS(lane 2)处理后,纯化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。
悬浮细胞
1.培养细胞并根据需要用活化剂或抑制l剂刺激。
2.进行细胞计数,然后通过离心沉淀细胞。
3.吸出培养基,并用冰冷的PBS洗涤两次。
4.完全除去PBS洗涤液,然后向细胞沉淀中加入冰冷的1X分析/裂解缓冲液
(每1 x 107池0.5 – 1 mL)。
5.通过重复移液裂解细胞。
6.将裂解物转移至适当大小的试管中,并置于冰上。
7.如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。如果这
发生时,裂解液可通过27号注射l器针头3-4次以剪切
基因组DNA。
8.通过离心10分钟(在4°C下为12,000 x g)清除裂解物。
9.收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用,或速冻并保存在-
70°C以备将来使用。
阳性和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意:体内刺激细胞会激l活大约10%的可用Rab35,而
体外GTPγS蛋白负载将激l活近90%的Rab35。
1.将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Rab35蛋白)。
2.向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(至20 mM终浓度)。
3.将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4.在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。
5.在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6.通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM
)。
产品描述
一系列结构多样的配体,从光子到大肽,激l活GPCRs来激发
它们的生理功能。配体结合的GPCRs,反过来,起到鸟呤核苷酸交换的作用Gβγ存在下Gα亚基上的GDP与GTP交换的催化因子,导致Gα亚单位与Gβγ二聚体分离形成两个功能单元(Gα和Gβγ)。Gα和Gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源,G蛋白分为四个家族:Gs,Gi、Gq和G12。增加这些G蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定,生理上G蛋白参与的过程正在增殖。
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