武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向提供的生物技术服务。原位杂交技术发展史原位杂交技术(Insituhybridization，ISH)是由分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产
植物RNA原位杂交检测技术服务
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向提供的生物技术服务。原位杂交技术发展史原位杂交技术(Insituhybridization，ISH)是由分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向提供的生物技术服务。应用：酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用，具有高度敏感性。
应用：酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用，具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。③杂交蛋白间稳定度可被结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强，后者又与启动子DNA结合， 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。同时， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。
（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的化学反应，经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对定位分析。
原位杂交在前。
（1）常规脱蜡入水。
（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
（3）滴加探针，加盖玻片，避光、湿盒、37℃过夜孵育。
（4）如果试剂盒允许的话，将试剂盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。
（5）加碱性磷酸酶标记的抗1体，37℃孵育半小时，洗去抗1体后显色。
免1疫组化在后。
（1）将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。
（2）在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中，微波至96℃左右，作用10min。
（3）滴加一抗，37℃湿盒孵育2h。
（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室温下孵育40-50min。
（5）DAB显色后，采用PBS中止显色反应。
（6）不要复染核，不然就盖住原位杂交信号了。
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