武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。Bendixen等人通过酵母接合型的引用,避免了两次转化操作,同时又提高了双杂交的效率。
目的探讨荧光原位杂交技术(flu
植物染色体原位杂交技术服务
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。Bendixen等人通过酵母接合型的引用,避免了两次转化操作,同时又提高了双杂交的效率。
目的探讨荧光原位杂交技术(fluorescenceinsftuhybridization,FISH)在复杂染色体异常产前诊断中的应用价值。方法对8例羊水、3例脐血常规G显带具有复杂染色体异常的产前诊断孕妇,应用FISH技术确定其复杂染色体重排及标记染色体的组成。结果FISH技术证实了G显带平衡易位的结果,同时明确了3例羊水中衍生染色体的组成、2例脐血中标记染色体的来源。
原位杂交的应用
①细胞特异性mRNA 转录的定位,可于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究。
②感1染组织中病毒DNA/RNA 的检测和定位,如EB 病毒mRNA、类乳1头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA 的检测。
③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录平的表达及其变化的检测。
④基因在染体上的定位。
⑤检测染体的变化,如染体数量异常和染体易位等。
⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿1瘤的诊断和物学剂量测定等。
石蜡切片的FISH要点
(1)组织固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比较适合的,PH很重要。较厚的组织块建议切开后再固定。这一点小编已经反复提过很多次了。良好的固定是所有病理实验的前提。
(2)对于石蜡切片来说,采用蛋白酶K作为消化液是更优的选择。消化条件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是极易失活的,失活了就没法充分消化,消化过度又会使细胞核变模糊。综合来看,小编更推荐蛋白酶K。
(3)石蜡切片的杂交温度一般都是37摄氏度。而杂交时间则需要摸索才能得到更佳时间。不过,一般的过夜孵育基本可以达到目的。
(4)FISH实验中非特异性着色是个难以避免的问题,我们能做的就是尽量减少背景。具体可作为的地方:充分严格漂洗、全程避免干片、探针浓度不宜太高、杂交温度要控制在37℃。
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