复苏细胞:
1. 将细胞冻存管由液态氮中取出,置于37度水浴溶解回温。此时可准备培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。
2. 于生物安全柜内,直接以少量培养基反复冲融,使细胞团块化冻。
3. 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g,3分钟离心收集细胞。
4. 倒去上清液,以新鲜培养基
QuickFreezing-M
复苏细胞:
1. 将细胞冻存管由液态氮中取出,置于37度水浴溶解回温。此时可准备培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。
2. 于生物安全柜内,直接以少量培养基反复冲融,使细胞团块化冻。
3. 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g,3分钟离心收集细胞。
4. 倒去上清液,以新鲜培养基重悬细胞,移到培养瓶中培养。
5. 隔天更换新鲜培养基,并观察细胞存活状况。
存储条件
储存于4℃以下,质量保障期从产品的生产日期起,为期两年。3个月以上没有使用冻存液计划时,尽可能-20℃冷冻保存。为避免重复冻融过程可能导致的冻存液下降和性能降低,推荐将产品分装成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。
冻存细胞复苏步骤:
1、 从冰箱中取出冻存的细胞,立即置于37℃水浴槽中解冻。
2、 待冻存管中的细胞混合液完全融化后,立即加入1ml细胞培养基于冻存管中与细胞混合,将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中,1000rmp离心5分钟,收集冻存细胞沉淀,移去上清液(注意勿将细胞沉淀倒掉)。
3、 加入适量的新鲜培养基,使用移液管缓缓加入细胞沉淀中,轻柔混匀,将混匀好的细胞移至事先准备好的培养容器中。
4、 镜检观察,待细胞状态恢复后可进行其他研究或者培养处理。
原位复苏方式:
1、从冰箱取出冻存培养板,立即放入37℃水浴槽中解冻。
2、待冻存的细胞悬液完全融化后,轻轻吸去细胞冻存液,按照常规换液操作加入新鲜培养基继续进行培养。
细胞冷冻保存方法
冻存管冻存方式:
1、按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
2、按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。(参考:5×105至5×106cells/ml)。
3、取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量,置于离心管中,离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min)。移去离心管中的上清液。
4、加入适量无血0清细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度为5×105至5×106 cells/ml。缓慢混合均匀,制成细胞混合液。
5、将离心管中的细胞混合液分装于已标示的冷冻保存管中建议每管1ml或1.5ml。。
6、直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱,冷冻保存。

产品特性
l 无动物源成分,无各类病毒、霉菌和支原体等污染的可能性
l 热源水平药典标准1/10,减少外源内毒0素干扰
l 无血0清成分,所有成分均为原0料药级别,极大降低批次间差异
l 冻存细胞复苏率高达90%
l 即用型产品,无需程序降温,冻存于-80℃冰箱或液氮中长期保存
操作方法
选择对数生长期的细胞冻存,有助于提高细胞复苏存活率。
1.1按照常用方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中。
1.2 1000rpm-1500rpm,5min离心,弃上清液。
1.3加入适量的Serum-Free细胞冻存液于离心管中,推荐细胞冻存浓度为 1×106 - 1×107 cells/ml。缓慢混合均匀,制成细胞悬液。
1.4将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。
1.5直接将冻存细胞放入-80℃冰箱,24h后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。
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