冻存袋实验前的准备
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降温机
冷冻方法理论准备:
(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-8O℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量消失,亦可
200-074-401冻存袋批发
冻存袋实验前的准备
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降温机
冷冻方法理论准备:
(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-8O℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量消失,亦可跳过此步骤直接放入-8O℃冰箱中。
(2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-8o℃以下) -120℃,再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
冻存袋,可千万别这么用哈!
1.不要使用金属管夹
2.不要离心
3.不要在冻存袋上直接写字标识冻存细胞的信息
4.不要在冻存袋表面粘帖标签不推荐使用同一冻存袋多次冻融细胞
5.DMSO稀释以后才能放进冻存袋,DMSO浓度不要超过10%
6.复苏细胞时建议把冻存袋放在一个保护袋中进行融化
7.不要超过冻存袋推荐的工作体积
细胞冻存步骤
(1)将标本编号,并用Marker笔仔细标注于冻存管管盖及管壁上,同时将每管编号、内容物、取材日期记录于登记本上。
(2)将冻存管装入冻存袋,戴上棉线手套和防护面罩,迅速放入液氮罐中30~60秒速冻,至冻存组织完全冻住,取出待液氮完全挥发(注意动作轻柔,避免液氮溅洒)。
(3)将经液氮速冻后的组织放入-80℃冰箱相应编号盒中,长期保存。
(4)取材完毕后,将剩余新鲜标本浸泡于10%中尔马林液中固定(切记不要拿错病理号),做好和当日冰冻值班医生的交接,避免遗漏。
(5)清洗取材台及取材器具,器具需用消毒液完全浸泡10~15min,清水冲洗后擦干置于干燥处保存备用,取材器具应定期高温消毒。
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