原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽提分离的染色体DNA,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(W.D.Benton)和戴维斯(R.W.Davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的DNA,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用
荧光原位杂交
原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽提分离的染色体DNA,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(W.D.Benton)和戴维斯(R.W.Davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的DNA,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体DNA上与探针互补顺序所在的位置。对检测转化群落中的DNA序列或任何一种插入的DNA序列,以及动植物的基因定位工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测,与免6疫组化技术的结合应用,能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放9射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交,此后得益于分子克6隆技术的发展,及不同探针标记系统和检测系统的应用,大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。

多种探针标记检测系统
基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。
荧光标记检测常为直接探针标记方法,如在dUTP/UTP/ddUTP上连接Fluorescein后进行核酸标记。由于标记在核酸上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验,以及荧光分子易于衰减,其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。
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