低温生物菌种——菌种分离方法介绍
孢子分离又可分为以下几种方法：
( 1 ）褶上涂抹法：选取新鲜、健壮、未开伞、未裂破的子实体，洗净后用75 %酒精表面灭菌2 分钟，然后连同培养基一起放入接种箱内，经熏蒸消毒12 ～ 24 小时，再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹，把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种，，后置于25 ～ 28 ℃恒温箱内培养，可得纯菌种。
水产养殖菌种种类
低温生物菌种——菌种分离方法介绍
孢子分离又可分为以下几种方法：
( 1 ）褶上涂抹法：选取新鲜、健壮、未开伞、未裂破的子实体，洗净后用75 %酒精表面灭菌2 分钟，然后连同培养基一起放入接种箱内，经熏蒸消毒12 ～ 24 小时，再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹，把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种，，后置于25 ～ 28 ℃恒温箱内培养，可得纯菌种。
( 2 ）孢子印采集法：取灭过菌的载玻片、试纸或黑布，置于新鲜、未开伞或未开裂的子体菌褶的下方。经24 小时后，便落下孢子，形成印痕（即孢子印）。然后，用接种环或玻璃棒蘸取孢子，接种在平面或斜面培养基上，进行恒温培养，可得纯菌种。
( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃钟罩、培养皿、三角架、搪瓷盘等组成。钟罩下为一搪瓷盘，直径25 厘米左右，盘内先垫衬4～6 层纱布，放1 副9 厘米直径的培养皿，大盖口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培养皿上放1 只铅丝绕成的三角架，再将带孔的玻璃钟罩盖上，顶上罩孔用棉塞塞好，用纱布包好整个孢子收集器，置于高压灭菌锅或蒸笼内灭菌2小时。
孢子收集器灭菌消毒后，放入无菌室或无菌箱内。然后，用小刀割取1 块4～5 厘米大小的子实体，插在收集器内的三角架顶上（若无孢子收集器，也可用培养皿代替）。再置于温度24 ～26 ℃下培养24 小时，培养皿中便可见到白色粉状物，此即为孢子。此时，可将孢子收集器再移至接种箱内，取出培养皿，盖好，并在培养皿内加入10 ～ 20 毫升的无菌水，使孢子散于本中，成为孢子悬浮液。然后，再用无菌打针筒或吸管吸取孢子悬浮液，接种于试管斜面培养基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃温度下培养5 ～ 7 天，培养基上便可长出白色菌落。待菌落直径有0 . 5 厘米时，选健壮的菌落，再移接于另一试管的斜面培养基上培养。当白色菌丝长满试管时，便得纯菌种。
低温生物菌种的使用温度
普通硝化细菌在温度15°C时，活性大幅度降低，硝化速度也明显下降，温度5°C时，普通硝化细菌的生命活动几乎停止，处于休眠状态，普通中温微生物适合生长温度为25~37℃，目前污水处理厂的处理工艺大都可实现15°C左右氨氮达标排放，当温度12°C时，中温菌的活性大大降低，甚至没有繁殖功能，使得污水厂COD、氨氮和磷处理效果变差，出水无法达标排放，投加COD去除剂，氨氮去除剂，除磷剂等化学絮凝剂或氧化剂，在增加污水厂运营成本的同时，又形成了二次污染。
生物菌种存活必备条件
1、保持土壤合理湿度
高温闷棚前，菜农多进行土壤翻耕，使得浇水水量极大，土壤湿度过高，通透性差，影响生物菌的增殖。因此，闷棚浇水时，要先起垄，浇小水保证土壤较为湿润即可，不要大水漫灌。
2、闭棚后不要立即升温
底肥需要生物菌发酵，若翻入土壤后立即浇水升温，多数菌种被扼杀，仅有少量嗜热菌可以存活，但粪肥发酵仅靠嗜热菌是完成不了的。
建议菜农翻地浇水后间隔几天，待土壤湿度降低，生物菌大量繁殖后再覆盖地膜、关闭通风口进行闷棚，此时低温菌种已经发挥作用，可以产生大量热量辅助闷棚，可大大改善闷棚效果。
3、促进生物菌繁殖
想要促进微生物增殖，可使用菌种含量高的菌剂，例如20亿的，可充分发挥菌剂作用。菜农要学会换位思考，生物菌喜欢什么样的条件，就创造什么样的条件，如此才能确保闷棚效果。
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