细胞融合
取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2
弗氏不完全佐剂
细胞融合
取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培养箱中培养。
杂交瘤细胞的筛选与克0隆
细胞融合后，培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中，培养后半定量换液，培养基更换时应注意轻缓，第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆，第 7 天左右，杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测，筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔，有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆，经过 3 次亚克0隆后，获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养，部分细胞用于腹0水制备单抗，部分细胞冻存备用。
1.免0疫：本产品与抗原混合搅拌能很快形成油包水状态，在1:1-1:2情况下都能形成稳定的乳液，1:2乳化较1:1粘稠些，乳化后滴水数周不散；经多品种抗原多种属动物测试免0疫效果极0好，由于乳
化彻0底牢固，因此跟其他佐剂相比比较不容易出现免0疫耐受现象。
2.单抗腹0水制备：将佐剂注射BALB/C小鼠腹腔，每只0.3-0.5ml处理腹腔15天左右（一般12-18天），然后注射杂交瘤细胞，建议每只注射80万-100万个。腹0水会比普通佐剂晚出1.5天-2天，但通
常情况下腹0水的量是普通佐剂出量的1.5-2倍，且单抗腹0水效价不变。
分类
1.生物性佐剂是细菌或其产物，其本身具有免0疫原性，如分枝杆0菌（结0核杆0菌、卡介苗）、短小棒状杆0菌、百0日咳杆0菌、革兰阴性杆0菌内毒0素等。此外发现粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-l、白细胞介素-2、干扰素-γ等的佐剂活性。2.无机佐剂如氢氧化铝、明矾、磷酸铝等。3.人工合成佐剂双链多聚肌苷酸、胞苷酸、双链多聚腺苷酸。4.油剂花生油乳化佐剂、矿物油、植物油、羊毛脂等。5.弗氏佐剂弗氏佐剂又分弗氏不完全佐剂和完全弗氏佐剂，是目前动物实验中zui常见的佐剂，但易在注射局部形成肉芽肿和持久性溃疡，因此不适用于人体使用。近年来，人工合成胞壁酰二肽作为卡介苗细胞壁中的一种成分，用于提高疫0苗的接种效果，是对人体无不良反应的有效佐剂。
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