1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑l制剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 M NaC
G蛋白活性检测试剂盒
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑l制剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 M NaCl,0.05%
吐温20)
9.免l疫印迹封闭缓冲液(TBST包含5%脱脂奶粉或3%BSA)
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
Arl3(类似Arf的3)是一种ADP-核糖基化因子(Arf)家族蛋白,在N端延伸方面不同于大多数Arf家族成员。 Arl3的核苷酸交换是的,并且与脂质和去污剂无关。 与GDT / GTP结合后,Arl3与一系列效应蛋白相互作用,并调节这些效应蛋白的活性,例如人类视网l膜基因4(HRG4),cGMP磷酸二酯酶的δ亚基(PDEδ)和Arl2的结合物(BART)。 Arl3还以可调节的方式结合微管,以通过与色素性视网l膜炎2(RP2)相互作用来改变胞质分裂的特定方面。 有人提出,RP2与Arl3协同作用,将光感受器中的细胞膜和细胞骨架连接为细胞的一部分
9.收集上清液并在冰上存储样品(约1-2 mg总蛋白)以进行中间使用,或将其冷冻并保存在-70°C下以备将来使用。
目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP,但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于克l隆抗l体对其抗原,活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠,重现性一致。
这些抗Arl1-GTP单克l隆抗l体也可用于监测细胞中Arl1的激l活免l疫组织化学检测。NewEast Biosciences Arl1激l活分析试剂盒提供了一种简单、的方法来监测激l活Arl1。每个试剂盒提供足够的量来进行20次分析。
分析原理
基于构型特异性抗Gα13-GTP的NewEast生物科学Gα13活化检测试剂盒
从细胞提取物或体外检测活性Gα13-GTP水平的单克l隆抗l体GTPγS负载Gα13活化试验。简单地说,抗活性Gα13小鼠单克l隆抗l体用含有Gα13-GTP的细胞裂解液培养。结合的活性Gα13将被蛋白质A/G琼脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l体免l疫印迹法检测沉淀的活性Gα13。
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