细胞冻存步骤
1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。
2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,1000rmp,5分钟离心收集培养细胞沉淀,彻0底弃去离心管中的上清液。
4. 加入适量的CELLSAVING细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度约为5×105-1×107/ml。轻柔地
哺乳动物细胞冻存液
细胞冻存步骤
1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。
2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,1000rmp,5分钟离心收集培养细胞沉淀,彻0底弃去离心管中的上清液。
4. 加入适量的CELLSAVING细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度约为5×105-1×107/ml。轻柔地混匀细胞,制成细胞混合液。
5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管1ml或1.5ml。
6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中,可长期冷冻保存。
7. 如果想液氮中长期保存,需先放入-80℃冰箱至少时间,方可移至液氮罐中保存。
自备材料:
1、细胞计数器
2、细胞冻存管
3、超低温冰箱或液氮
4、超净工作台
操作步骤(仅供参考):
1、培养细胞至对数生长晚期,显微镜观察其外观、形态、有无污染等,取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞,用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化,进行细胞计数;如为悬浮生长细胞,进行细胞计数。
2、500~1000g离心5min,弃上清。
3、加入适量的通用细胞冻存液,重悬细胞,使细胞浓度达到1~10×106/ml,置于冻存管中,密闭、不要拧的太紧,避免弯曲变形。
4、一般遵循1℃/min的速率进行冷冻。亦可采用4℃20min,-20℃30min,-70℃过夜,zui后置于液氮罐中长期存储。
您是否也经常有这些困扰?
每次冻存细胞都需要现配冻存液,太麻烦
程序降温(4℃~-20℃~-80℃~液氮),太繁琐太耗时
90%血0清+10%DMSO冻存,成本太高
细胞比较娇贵,细胞冻存后复苏率太低
日本A/B无血0清冻存液好用,价格太高
那是时候换一款无需程序降温的细胞冻存液了~~
特别配方有效提高细胞冻存活率和复苏活力
不含血0清,不含动物来源性蛋白
能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染
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通用于各种动物细胞株
适用于一般培养细胞的冻存
也适用于无血0清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存
操作简便,无需程序降温
直接置于-80℃冰箱长期保存
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