PCR反应特点
灵敏度高:PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶1细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
简便、:PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DN
RNA扩增试剂盒
PCR反应特点
灵敏度高:PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶1细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
简便、:PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放1射性污染、易推广。
纯度要求低:不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。
PCR法不仅仅局限于分子生物学,还因其简便、迅速等特点被广泛应用于医学、法医学、食品、环境卫生检验、动植物检验等其它领域。Taq DNA聚合酶是PCR法普遍使用的聚合酶,但其具有如下局限性。
1. 可信度 (Fidelity):通常Taq DNA Polymerase的Fidelity并不高,PCR反应有时会出现错配 (Misincorporation) 现象,因而PCR克1隆、变异导入等实验中,需加以注意。
2. 扩增的DNA长度:使用Taq DNA Polymerase进行PCR扩增时,通常可扩增几kb的DNA,超过10 kb则比较困难。这就给利用PCR进行Mapping等Genome解析带来麻烦。
3. 扩增量:使用Taq DNA Polymerase进行PCR产物克1隆及食品、环境卫生检验等时,扩增量常常达不到要求。为解决以上难题,Takara在对Polymerase、Buffer及反应条件等进行深入研究的基础上,开发了LA PCR (Long and Accurate PCR) 技术,运用此技术可大量正确地扩增长达40 kb 的DNA部分片段。LA PCR技术扩展了PCR的应用范围,可在Genome解析、基因诊断、长片段 DNA的克1隆及变异导入等方面发挥优势。
基因分型
PCR可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如,基因敲除和敲入小鼠等生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼,可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。
但是如果为了检测特定核苷酸突变,则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如, PCR扩增子测序就是研究单核苷酸变异(SNVs)和单核苷酸多态性(SNP)的方法之一。强烈推荐使用高保真DNA聚合酶,以防止在PCR过程中引入多余的突变。
通过PCR进行基因分型也是对癌1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。
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