回收产物的检测
1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰,当OD260=1时,相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时,说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液,而是用去离子水,会使比值偏低,因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。
2.SYBR法检测取回收产物1 μL,与1
核酸纯化
回收产物的检测
1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰,当OD260=1时,相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时,说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液,而是用去离子水,会使比值偏低,因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。
2.SYBR法检测取回收产物1 μL,与1 μL SYBR染料混匀,于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。
3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL,与10×Loading Buffer混匀,DNA Marker加5 μL,电泳后凝胶成像观察。
5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA,观察目的条带亮度大致为Marker的两倍,则大致估算其浓度约为20 ng/μL。
适用于PCR研究的提取法:
1 田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右,新鲜叶片放于1 5ml离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。
2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5cm长)放在点穴式研板中。
3 加入400μlDNA提取缓冲液,用玻棒将叶组织研细,直到液体变成深绿色即可。
4 再加400μlDNA提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。
5 加400μl氯1仿,混合均匀后,2400×g离心30s,将上清液转入一支新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。
6 加800μl无水乙醇,混匀,2400×g离心3min。弃上清。
7 70%乙醇冲洗,风干。
8 用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃。
9 取1μl用于PCR分析。
新冠核酸检测是对病例确诊的标准之一,是病例早发现、早诊断、早隔离、早cure的关键,也是对传1染源隔离cure和密切接触者医学观察的基础。
新冠感1染人体后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖, 因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感1染病毒。在感1染一段时间以后(一般是7-10天),人体会产生针对病毒的特异性抗1体,所以用免1疫学检测方法能够检测这些特异性抗1体,判断人体是否感1染过病毒。这就是病毒的核酸检测与抗1体检测。与抗1体检测相比,核酸检测更加灵敏,也是实验室检测的“金标准”。
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