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HT选择性培养基 50X常用解决方案「博特龙」

-20℃保存 本产品是含有次黄piào呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的混合物,适用于杂交瘤筛选和细胞培养应用。 HAT选择性培养基,HAT是黄piào呤(Hypoxantin)、氨基蝶呤(Aminopterin)和胸腺嘧0啶脱氧核苷(Thymidin)三种物质英文首字母缩写,用于筛选具有次黄piào呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷
HT选择性培养基 50X







-20℃保存

本产品是含有次黄piào呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的混合物,适用于杂交瘤筛选和细胞培养应用。

HAT选择性培养基,HAT是黄piào呤(Hypoxantin)、氨基蝶呤(Aminopterin)和胸腺嘧0啶脱氧核苷(Thymidin)三种物质英文首字母缩写,用于筛选具有次黄piào呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞的培养基,是含有次黄piào呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的完全培养基。在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下,这种酶缺陷的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄piào呤和胸苷。HPRT和TK缺陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨0髓杂交瘤细胞选择性培养基




1.试剂盒组分

1.1. 包被缓冲液(10×浓缩) 25ml ×1 瓶

1.2. BSA 封闭液(10×浓缩)100ml ×1 瓶

1.3. 洗涤缓冲液(20×浓缩)250ml ×1 瓶

1.4. 可溶性 TMB 单组分 250ml×1 瓶

1.5. 终止液 120ml×1 瓶

1.6. HRP 标记抗小鼠 IgG (H+L)抗0体:1 ml ×1 支(0.1mg/ml)

储存在 2~8℃,有效期 2 年,可以完成 20 块 96 孔酶标板检测。

2.试剂盒不提供的试剂或耗材

2.1. 小鼠的一抗

2.2. 亲和层析纯化的未标记捕获抗0体

2.3. 酶标板(不建议用组织培养板)

2.4. 吸水纸、毛巾或棉布

2.5. 蒸馏水或纯化水

2.5. 移液器试剂瓶等

2.6. 多通道排qiang和加液槽

2.7. 手套

2.8. qiang头

3.检测原理

3.1 杂交瘤筛选

可以检测杂交瘤培养液中的特异性抗0体,使用适当标记二抗,可以检测抗原特异性的小

鼠抗0体。




4.3.2 洗板

加标本和酶标抗0体后需要洗涤,通过洗涤可以去掉未反应试剂帮助降低本底。满意的洗涤方法是孔与孔之见均匀一致并且没有液体的相互污染。洗涤时将板子翻转并将液体甩掉拍净。洗涤液中含有 0.1%吐温-20 以抑制非特异性结合。如果实验过程中断,应该将酶标板中加入洗涤液以避免酶标板干燥。

4.3.3 HRP 标记抗0体

HRP 标记的抗0体作为检测抗0体,与底物反应后,使底物显色。实验过程中避免接触叠

氮钠,叠氮钠可使 HRP 失活。

4.3.4 底物

使用 TMB 底物,一般来说,产生的颜色与待测物浓度呈正比。




7.1.1 包被抗原

1. 加抗原到酶标板中。

2. 室温孵育 1 小时。

3. 甩掉板中液体并拍净残液,每孔加入洗涤液 200ul,洗涤 3 次并拍净残液。

7.1.2 封闭酶标板

1.加 200 uL 1X BSA 稀释/封闭液到每孔中。

2. 孵育 30-45 分钟, 甩掉板中液体并拍净残液,每孔加入洗涤液 200ul,洗涤 3 次并拍净

残液。

7.1.3 与含单克0隆抗0体的培养液反应

1.每孔中加 100 uL 含单克0隆抗0体的培养液。

2. 室温反应 1 小时.

3. 甩掉板中液体并拍净残液。

7.1.4 洗板

1. 加入 1X 洗涤液。

2. 甩掉板中液体并拍净残液。

3. 重复 3~5 次。





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