聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA部分片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA copy,PCR的zui大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶1杀案中凶1手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国
一步法荧光定量RT-PCR试剂盒
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA部分片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA copy,PCR的zui大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶1杀案中凶1手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年,PCR已发展到第三代技术。1976年,科学家钱嘉韵,发现了稳定的Taq DNA聚合酶,为PCR技术发展也做出了基础性贡献。
差示PCR (differential PCR, d -PCR)技术
d-PCR可以定量检测标本靶基因的拷贝数。它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于一个
试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带,比较两条区带的丰度,或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的基因的拷贝数。
定量PCR(quantitative PCR, qPCR)技术
qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量,涉及目的mRNA和内标用
相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用 于研究基因表达。能提供特定DNA基因表达水平的变化.在癌1症、代谢紊乱及自身免1疫性疾病的诊断和分析中很有价值。
梯度PCR仪
把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常12钟温度梯度,这样的仪器就叫梯度PCR仪。
工作模式和原理同普通PCR仪一样,它出了又普通PCR仪的功能外还多了一个梯度退火功能。DNA部分片段的扩增对温度的控制精度要求特别高,不同的DNA部分片段其退火温度不一样,通过计算DNA部分片段中的CG碱基的含量只能初步的判断出zui优退火温度在+5℃范围内,如果用普通PCR仪进行研究,需重复扩增很多次,然后做电泳进行分析来确定zui优退火温度。而梯度PCR仪则只需要一次就可以完成,在节省了时间的同时提高了实验的可靠性和准确性。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,这样节约成本的同时也节约了时间和经费。在不设置梯度的情况下,梯度PCR仪也可以做普通PCR扩增。
该仪器主要应用于科研,教学机构,医学临床研究,高等院校,病毒分析,疾控中心等。
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