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液相色谱在使用过程中四大关键因素

1.液相色谱仪本身：对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

2.色谱条件：色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。

流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。

3.操作人员：首先，作为液相操作人员，一定要认真学习夜想的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握基础故障的排除和维修。

4.液相安装环境：液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。

液相色谱理论

发展简况液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。

液相色谱的前世今生

早在古代罗马时期，人们已知道将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上，通过观察溶液展开产生的同心圆环来分析染料与色素。实际上，这种简单操作已经采用了现代色谱学的基本原理。

19世纪中叶，德国化学家Runge对古罗马人的这种方法作了重要的改进，使其具有良好的重现性与定量能力，使盐溶液可在纸上分离；另外，化学家Goppalsr-oeder也在长条纸上分离了染料和动植物色素，这些研究标志着纸色谱法的建立，并逐步发展成为现代色谱技术。

1903年，俄国植物学家Tswett在华沙自然科学学会生物学会会议上发表了题为“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”中，提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法，这一工作标志着现代色谱学的开始。他将碳酸钙装入竖直的玻璃柱中，从顶端倒入植物色素的石油的醚浸取液，进一步采用溶剂冲洗，使溶质在柱的不同部位形成色带，首先向人们公开展示了采用色谱法提纯的植物色素溶液以及色谱图显示着彩色环带的柱管。Tswett将这种方法命名为色谱，管内填充物被称之为固定相，冲洗剂被称之为流动相。