原位杂交技术基本原理
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序
原位杂交检测
原位杂交技术基本原理
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。
原位杂交技术可应用于什么方面
1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。
2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。
3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
４.基因在染色体上的定位。
5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。
6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免6疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放9射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克6隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统的应用，大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。
另一种多聚体促进剂是聚丙0烯0酸，用其钠盐，浓度为2%～4%。与硫酸葡聚糖相比，其优点是价格低廉，粘度低（MW=90 000）。小分子化学试剂酚和Guandine thiocyanate也能促进杂交，它们可能是通过增加水的疏水性和降低双链和单链DNA间的能量差异而发挥作用。酚作为杂交促进剂，只能在低DNA浓度的液相杂交中观察到，该方法曾被称为酚乳化复性技术，该法不能用于固相杂交，因酚可引起核酸与膜的非特异吸附作用，即使在液相杂交中的应用也是有限的。而Guandine thiocyanate可通过降低双链DNA的Tm值而起作用。此外，该分子还可以促进RNA的杂交，有裂解细胞而抑制RNase的作用。总之，硫酸葡聚糖和聚乙二醇因能用于固相杂交是目前zui常用的杂交促进剂。
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