冻存袋技术
是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,起到了细胞保种的作用。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。
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冻存袋技术
是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,起到了细胞保种的作用。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。
冻存袋注意事项
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态,约为80~90%致密度。
冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma应在冷冻保存至二日测试是否有antibody之产生。
2.细胞在液氮中可长期冻存没有时间限制,而不会影响细胞活力﹔在-70度可保存数月。注意冷冻保护剂之。
DMSO应为试剂级等级,无菌且无色是直接购买无菌产品,以5~10m1小体积分装,4℃避光保存,勿作多次解冻。
3.冻存细胞数量要足够。无论再怎么小心,细胞在冷冻和复苏过程中总会死掉一批的。所以,一开始冻存细胞的数量要足够。一般要达到5× 10^6 /毫升,一瓶不够两瓶凑。但是,这个不能一概而论。有些细胞,比如杂交瘤细胞,只需要1-3x 10^6 /毫升
使用冻存袋的注意事项
1、使用冻存袋储存样本时,严格要求应把冻存袋放入液氮的气相层或冰箱中保存!如果冻存袋储存于液氮液体中,液氮有一定几率会渗入冻存袋内部,复苏时液氮气化导致管内外压力不平衡,这样极易造成冻存管的炸裂,并具有生物危害性。
2、冻存的样本量不要超过冻存袋要求的大工作体积。
3、用毕暂时不再使用时,应洗净并擦净活栓,在活栓处应垫一纸条,以防粘连。
冻存袋使用需要注意?
1、操作冻存袋复苏,全程使用安全防护设备,建议穿实验服、戴棉质手套且在安全的实验台上进行操作。条件允许情况下,请佩戴护目镜或防护面罩。由于夏季室内温度会高于冬季,请格外小心。
2、冻存细胞储存过程中,冻存袋的冷冻温度须均匀。不均匀的受冻将会导致冰塞的产生,冰塞会抑制两侧的液体温度传递进而产生危险的高压力并导致冻存袋受损。
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