原位杂交技术可应用于什么方面
1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。
2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。
3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
４.基因在染色体上的定位。
5.检
原位杂交
原位杂交技术可应用于什么方面
1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。
2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。
3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
４.基因在染色体上的定位。
5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。
6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传
多种探针标记检测系统
基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。
荧光标记检测常为直接探针标记方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上连接Fluorescein后进行核酸标记。由于标记在核酸上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验，以及荧光分子易于衰减，其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。
在条件都得到满足的情况下，杂交的成败就取决于保温时间。时间短了，杂交反应不完成；时间长了也无益，会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年Britten和Kohne推荐用Cot =值来计算杂交反应时间。Cot 值实际上是杂交液中单链起始浓度（Co）和 反应时间（t）的乘积。实验表明Cot =100时，杂交反应基本完成。Cot=0，基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的DNA 400μg/ml（按单股DNA每微克 紫外吸收值为0.024计算，总的吸收值为 9.6），如果反应时间为21h，那么对于未标记的DNA来说，Cot =9.6/21 =100.8,，杂交完成了。对标记DN A（浓度为0.1μg/ml）来说Cot值为0.05，这就充分排除了标记DNA的自我复性。Tm值25℃时杂交zui佳，所以首先要根据公式（4）计算杂交体Tm 值。由此式可见，通过调节盐浓度、甲酰胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。
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