综上所述，新的改良的小鼠免0疫方法具有很好实验效果。孕妇血0清AFP水平的变化与唐氏综合征有密切关系。目前孕中期人绒毛膜促性腺激0素(HCG)联合AFP筛查唐氏综合征胎儿已成为欧美亚许多常规服务项目之一，在假阳性率为5％左右情况下，这种筛查方案对唐氏综合征的检出率可以达65％～75％[9-11|。因而免0疫方法测定血0清中AFP浓度已在临床得到广泛应用。羊水和母体血0清中A
3周标准鼠单抗
综上所述，新的改良的小鼠免0疫方法具有很好实验效果。孕妇血0清AFP水平的变化与唐氏综合征有密切关系。目前孕中期人绒毛膜促性腺激0素(HCG)联合AFP筛查唐氏综合征胎儿已成为欧美亚许多常规服务项目之一，在假阳性率为5％左右情况下，这种筛查方案对唐氏综合征的检出率可以达65％～75％[9-11|。因而免0疫方法测定血0清中AFP浓度已在临床得到广泛应用。羊水和母体血0清中AFP浓度的升高，对胎儿神经管缺陷和其他遗传缺陷的产前诊断，也具有应用价值。在大多数原发性肝细胞癌和内胚窦癌患者血0清中AFP浓度升高，检测AFP有助于肿0瘤的早期诊断，也是在治0疗过程中观察疗0效的一项指标。采用本实验新改进的方法制备AFP—McAb，对胚胎发育、癌变过程中基因表达、AFP的纯化、肝0癌的导向治0疗以及提供诊断0试剂等都有重要的实际应用意义。
1． 9 腹0水效价的测定
1 mg /mL 的 MRJ 原核表达白每孔 100 μL，包被Elisa 酶标板过夜，以 SP2 /0 细胞培养上清为阴性对照，用间接 Elisa 方法检测腹0水的效价。同时 WesternBlot 检测抗0体使用于 Western Blot 的效价，用 MRJ 重组蛋白做 抗 原 进 行 SDS-PAGE 电 泳，用 制 备 的 MRJ单克0隆 抗0体 作 为 一 抗，设置抗0体稀释浓度 分别为1∶ 500; 1 ∶ 1 000; 1 ∶ 2 000; 1 ∶ 3 000; 1 ∶ 5 000。进 行Western Blot 检测。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度（按每针次50μl用量配制）。
备注：推荐使用的抗原用量为
（1）免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg；
（2）亚单位蛋白抗原每针次1-10μg；
（3）免0疫原性较强的灭活病原微生物和病毒样颗粒抗原每针次1-10μg；
（4）肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。
2. 37oC水浴中解冻佐剂，充分混匀，无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比1:1混匀。
3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0注射免0疫小鼠，每只小鼠注射100μl。
4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次免0疫佐剂和抗原现配现用
5. 第014天通过ELISPOT、胞内细胞0因子染色、MHC四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或引流淋巴0结中的抗原特异性CD4+ TH1和/或CD8+ CTL反应。
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在McAb的研制过程中，动物免0疫是McAb制备过程中的关键步骤。但是传统动物免0疫方式通常需要二个月左右，不但耗时长，而且抗原消耗的量大、对抗原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免0疫小鼠的方法，大大缩短动物免0疫时间并减少了抗原的消耗量，为进一步组装患者肿0瘤组织及血0清中AFP水平检测的试剂盒打下良好的基础，为临床研究、肿0瘤的诊治提供更为有效的_丁．具。
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