动物免0疫
使用 quickantibody 作为免0疫佐剂，对小鼠腿部肌肉注射免0疫，MRJ 重组蛋白( 1 μg /mL) 与免0疫佐剂各200 μL 混匀免0疫 6-8 周龄 BALB / c 小鼠 4 只，每只注射 100 μL。初次免0疫后第 21 天同样的方法进行第二次免0疫，第 35 天尾静脉取少量血做效价检测，间接 ELISA 检测效价滴度高于 1 ∶ 8
多抗制备佐剂
动物免0疫
使用 quickantibody 作为免0疫佐剂，对小鼠腿部肌肉注射免0疫，MRJ 重组蛋白( 1 μg /mL) 与免0疫佐剂各200 μL 混匀免0疫 6-8 周龄 BALB / c 小鼠 4 只，每只注射 100 μL。初次免0疫后第 21 天同样的方法进行第二次免0疫，第 35 天尾静脉取少量血做效价检测，间接 ELISA 检测效价滴度高于 1 ∶ 8 000 则进行冲击免0疫，冲击免0疫直接以不加佐剂的 MRJ 蛋白对小鼠冲击免0疫一次，每只 20 μg。冲击免0疫后 96 h 内取脾0脏细胞做细胞融合。
饲养层细胞制备
于细胞融合天，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的数目应适宜，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底 30% 为好。
1． 9 腹0水效价的测定
1 mg /mL 的 MRJ 原核表达白每孔 100 μL，包被Elisa 酶标板过夜，以 SP2 /0 细胞培养上清为阴性对照，用间接 Elisa 方法检测腹0水的效价。同时 WesternBlot 检测抗0体使用于 Western Blot 的效价，用 MRJ 重组蛋白做 抗 原 进 行 SDS-PAGE 电 泳，用 制 备 的 MRJ单克0隆 抗0体 作 为 一 抗，设置抗0体稀释浓度 分别为1∶ 500; 1 ∶ 1 000; 1 ∶ 2 000; 1 ∶ 3 000; 1 ∶ 5 000。进 行Western Blot 检测。
1. 第21天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。
2. 第35天采微量血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。
3. 若抗0体滴度没有达到要求，可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免0疫2针，而家兔往往需要免0疫3针。
4. 若免0疫3针，可在第52-56天采微量血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。备注：佐剂免0疫效果有时也与抗原特性有关，若免0疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免0疫。
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