DNA测序检测
1. PCR测序反应
(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂:
所加试剂测定模板管标准对照管
BigDye Mix
1μl
待测的质粒DNA
1μ 1
pGEM-3Zf (+)双链DNA
-1μ1
待测DNA的正向引物
M13(-21)引物- 1μ 1
灭
荧光定量pcr
DNA测序检测
1. PCR测序反应
(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂:
所加试剂测定模板管标准对照管
BigDye Mix
1μl
待测的质粒DNA
1μ 1
pGEM-3Zf (+)双链DNA
-1μ1
待测DNA的正向引物
M13(-21)引物- 1μ 1
灭菌去离子水
2μ 1
总反应体积5μ 1,不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，稍离心。
(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪.上进行扩增。98C变性2min后进行PCR循环，
PCR循环参数为96C 10s， 50C 5s， 60°C4min， 25 个循环，扩增结束后设置4C保温。
2.乙醇法纯化PCR产物
(1) 将混合物离心，将扩增产物转移到1.5ml EP管中。
(2)加入25μ 1/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于
4C离心30 min,小心弃上清。
(3)加70%(V/V)的乙醇50μ 1 洗涤沉淀2次。12 000r/min 于4C离心5min,小心弃上清和
管壁的液珠，真空干燥沉淀10~ 15min。
3.电泳前测序PCR产物的处理。
(1)加入12μ 1的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。
(2)将溶液转移至盖体分离的0.2ml PCR管中，稍离心。
(3)在PCR仪上进行热变性(95C 2min),冰中骤冷，待_上机。
4..上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立
运行的测序顺序文件。
5.仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过
序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。
6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。
miRNA测序
microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。microRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达（新发现miRNA也能在转录水平调控基因表达）。miRNA在物种进化中相当保守，在动物、植物和真菌等中发现的miRNA表达均有严格的组织特异性和时序性。miRNA在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。
目前研究miRNA的方法主要是realtime-PCR、生物芯片技术以及第二代测序技术。衣壳里是线状双链DNA分子，两端各有长约100bp的反向重复序列。基于第二代测序技术的miRNA测序，可以一次获得数百万条miRNA序列，能够鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同疾病状态下已知和未知的miRNA及其表达差异，为研究miRNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。
分子生物学检测服务
随着生命科学和化学的不断发展，人们对生物体的认知已经逐渐深入到微观水平。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类疾病发生和发展中作用的日益关注，lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。从单个的生物体到qi官到组织到细胞，再从细胞结构到核酸和蛋白的分子水平，人们意识到可以通过检测分子水平的线性结构（如核酸序列），来横向比较不同物种，同物种不同个体，同个体不同细胞或不同生理（病理）状态的差异。这就为生物学和医学的各个领域提供了技术平台。分子生物学检测技术是现代分子生物学与分子遗传学取得进步的结晶，是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。近年来，分子生物学检测技术的方法学研究取得了进展，先后建立了各种分子生物学检测技术。
二、使用说明
1、装载探针
对于刺激时间较短（通常为2小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞。对于细胞刺激
时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1：1000用无培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。借助的技术优势，英瀚斯生物特配备了高l效的仪器设备，如SLAN48P荧光定量PCR检测系统、PCR仪、电泳仪、冷冻离心机、高速离心机等。用无细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
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