QuickAntibody-Mouse5W （5周标准鼠单抗/多抗制备佐剂）
QuickAntibody-Mouse5W用途
通过5周2针的标准免0疫程序制备小鼠单克0隆和多克0隆抗0体，ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）可达到1:10000-1:10000000。
QuickAntibody-Mouse5W使用方法（详见使用说明书）
1.
lipo3000
QuickAntibody-Mouse5W （5周标准鼠单抗/多抗制备佐剂）
QuickAntibody-Mouse5W用途
通过5周2针的标准免0疫程序制备小鼠单克0隆和多克0隆抗0体，ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）可达到1:10000-1:10000000。
QuickAntibody-Mouse5W使用方法（详见使用说明书）
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度（按每针次50μl用量配制）。
备注：推荐使用的抗原用量为
（1）免0疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1-5μg；
（2）免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-20μg；
（3）偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20-50μg。
2. 充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比1:1迅速混匀。
备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。
【摘要】 目的建立一种制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。 方法 以常规和改良两
种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。
用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。 结果 在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫
抗0体，与常规免0疫法相比有极显著差异(P<0．001)，同时改良法的细胞融合率和抗0体阳性率也显著高于常规免0疫法
(P
常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。
综上所述，新的改良的小鼠免0疫方法具有很好实验效果。孕妇血0清AFP水平的变化与唐氏综合征有密切关系。目前孕中期人绒毛膜促性腺激0素(HCG)联合AFP筛查唐氏综合征胎儿已成为欧美亚许多常规服务项目之一，在假阳性率为5％左右情况下，这种筛查方案对唐氏综合征的检出率可以达65％～75％[9-11|。因而免0疫方法测定血0清中AFP浓度已在临床得到广泛应用。羊水和母体血0清中AFP浓度的升高，对胎儿神经管缺陷和其他遗传缺陷的产前诊断，也具有应用价值。在大多数原发性肝细胞癌和内胚窦癌患者血0清中AFP浓度升高，检测AFP有助于肿0瘤的早期诊断，也是在治0疗过程中观察疗0效的一项指标。采用本实验新改进的方法制备AFP—McAb，对胚胎发育、癌变过程中基因表达、AFP的纯化、肝0癌的导向治0疗以及提供诊断0试剂等都有重要的实际应用意义。
抗原制备及纯化
抗原制备: 参照文献［10］制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 OD600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG，37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG，37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。
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