分析试剂盒配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 温育:操作同3。 洗涤:操作同5。 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色
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分析试剂盒配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 温育:操作同3。 洗涤:操作同5。 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
滴定检测中用间接法配制的标准滴定溶液,应选择检测纯试剂配制,再用基准物质标定。如对检测测定结果要求不是很高的实验,也可用优级纯或检测纯代替基准试剂作标定。滴定检测中所用的其他试剂一般为检测纯试剂。仪器检测中一般选择优级纯或试剂,测定微量成分时应选用高纯试剂。
配制定量或定性检测中的普通试液和清洁液时应选用化学纯试剂。需要注意的是,试剂的级别要求高,检测实验用水的纯度及容器、仪器洁净程度也有特殊要求,必须配合使用,方能满足要求此外,由于进口化学试剂的规格、标志与我国化学试剂现行等级标准不甚相同,使用时可参照有关化学手册加以区别。
3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白质量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml PBS预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
碳酸氢钠是碳酸的单钠盐,具有碱化和电解质置换特性。解离后,碳酸氢钠形成钠离子和碳酸氢根离子。离子形成会增加血浆碳酸氢盐并缓冲过量的氢离子浓度,从而导致血液 pH 值升高。碳酸氢钠是一种白色结晶粉末,通常用作 pH 缓冲剂、电解质补充剂、全身碱化剂和局部清洁溶液。
甘氨酸(也称为 2-氨基)是一种氨基酸和神经递质。身体自己产生甘氨酸,由其他天然生化物质合成,常见的是丝氨酸,还有和苏氨酸。我们也通过食物消耗甘氨酸。这种氨基酸存在于高蛋白食物中,包括肉类、鱼类、鸡蛋、乳制品和豆类。日常饮食通常包括约 2 克甘氨酸。
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