为什么需要冻存袋？
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活物开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是没有限制的。
CS250冻存袋供应商
为什么需要冻存袋？
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活物开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是没有限制的。
细胞冻存的操作步骤
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
冻存细胞的装置及方法
本发明的装置由细胞冻存袋;细胞冻存盒,细胞架组成,细胞冻存袋置于细胞架上,细胞架置于细胞冻存盒内.批量冻存细胞的方法:将细胞悬液装入细胞冻存袋中置于细胞架上,再将细胞架放入细胞冻存盒内;将细胞冻存盒投入液氮罐或-7O°C以下冷冻设备冷冻24小时,将细胞冻存袋取出投入液氮中或-70CI以下冷冻设备长期冻存,当需解冻细胞时,拉出细胞冻存袋放入38C-39C℃ 的温水中解冻当凝固物都融化为液体后移入无菌操作台,按无菌操作程序操作将细胞冻存袋中的细胞悬液分装入离心管中离心,弃上清液,按常规解冻细胞来操作.本发明的细胞冻存袋冻存细胞体积达50-200ml,整套装置直接投入液氮中或放入-70°C以下冷冻设备.
细胞冻存的方法
1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。
2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。
3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。
5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。
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