细胞冻存的操作步骤
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存
200-074-400冻存袋供应商
细胞冻存的操作步骤
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
冻存袋使用需要注意？
1、操作冻存袋复苏，全程使用安全防护设备，建议穿实验服、戴棉质手套且在安全的实验台上进行操作。条件允许情况下，请佩戴护目镜或防护面罩。由于夏季室内温度会高于冬季，请格外小心。
2、冻存细胞储存过程中，冻存袋的冷冻温度须均匀。不均匀的受冻将会导致冰塞的产生，冰塞会抑制两侧的液体温度传递进而产生危险的高压力并导致冻存袋受损。
冻存袋方法的改进
自1977年以来,我们应用四级梯度降温冻存法对30余株哺乳动物细胞及2株节肢动物细胞共1000多支安瓶进行了冷冻保存,效果较好,大部分细胞的活存率在70%以上。在此基础上对8株抗登革4型(DEN一4)病毒杂交瘤细胞400多支安靓进行了冻存。鉴于四级降温冻存法步骤多,需要经过4℃冰箱和一20℃冰箱长达7~8小时的梯度降温,较难适应单工作中细胞冻存的需要。因此,自1982年以来我们摸索了影响细胞冻存的主要因素,确定了杂交瘤细胞冻存的适保护剂浓度(1.2〕,并研制成功细胞冻存简易装置。
冻存袋操作流程
（1）冰冻当天进入医院局域网，查询当日手术间冰冻安排表，大致了解当日的冰冻情况，并提前通知当日负责冰冻送片的初检医生，避免遗漏。
（2）取材前确定标本冰冻报告已发出，核对标本病理号、住院号，准确记录其病理号、住院号、姓名（至少有其中2项）于冻存组织登记本上。
（3）在新鲜标本取材台上取材，并使用取材器具，同使用频繁时，每取完一例标本器具应清洗后浸泡于消毒液中，以防止其他标本污染。
（4）在不影响外检取材的前提下，充分取材。良变取足够量病灶，病变取足够量病灶及癌旁正常组织（癌旁正常组织远离病灶应尽量>2cm）。
（5）将所取标本切割成直径1～2mm的组织块，不同标本及同一标本不同部位装入相应冻存管中，做好标记（注意顺序，切取标本、夹放冻存管都应遵循“先正常-后”的顺序，避免组织污染）。
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