传统小分子特异性antibody制备技术
为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性,必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质:如OVA、BSA、KLH等偶联,将其制备成完全抗原,通过immune宿主动物,便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody,这类antibody通过
植物DNA提取
传统小分子特异性antibody制备技术
为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性,必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质:如OVA、BSA、KLH等偶联,将其制备成完全抗原,通过immune宿主动物,便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody,这类antibody通过抗原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前,通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备,但是也可能由于小分子的结构特异,偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。
DNA提取过程中各种试剂的作用及原理
溶液II-NaOH-SDS液:NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6, 因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS:
SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。 但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA时)受到干扰。
溶液III--3mol/L NaAc(pH4.8)溶液:
NaAc的水溶液呈碱性,为了调节pH至4.8,必须加入大量的冰醋酸。 所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液,调回pH至中性, 使变性的质粒DNA能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、 RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合.
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