4-8℃保存本产品是次黄piào呤和胸腺嘧0啶核苷的混合物,适用于杂交瘤筛选和细胞培养应用。HT培养基添加剂(HT Supplement),是次磺piào呤(Hypoxanthine,10mmol/L)和胸腺嘧0啶核苷(Thymidine,1.6mmol/L)的混合剂,用培养液稀释,作为DNA补救合成途径的补充剂用于杂交瘤筛选培养基的添加剂和营养添加剂以克服细胞内残留氨基喋呤(A
细胞融合
4-8℃保存
本产品是次黄piào呤和胸腺嘧0啶核苷的混合物,适用于杂交瘤筛选和细胞培养应用。
HT培养基添加剂(HT Supplement),是次磺piào呤(Hypoxanthine,10mmol/L)和胸腺嘧0啶核苷(Thymidine,1.6mmol/L)的混合剂,
用培养液稀释,作为DNA补救合成途径的补充剂用于杂交瘤筛选培养基的添加剂和营养添加剂以克服细胞内残留氨基喋呤(Aminopterin)
对DNA经典合成途径的抑制作用。HT培养基(HT Supplement)为无菌透明溶液,经0.1μm微孔滤膜过滤。

4.3.5 对照和标本
每次实验都要包含适当的对照以用于分析检测体系的效能。定量 ELISA 要以标准品进行比较。每次实验要设以下对照:
4.3.6 本底对照:不加标本,其它试剂都加,可以帮助分析非特异性本底的原因。将实验结果减去本底以保证实验之间的可比性。
4.3.7 阴性对照:加已知的阴性参考品。
4.3.8 阈值对照:加弱阳性参考品用于确定阳性的临界值。
4.3.9 阳性对照:加强阳性参考品以确定zui大线性信号。
对照和标本都用 BSA 稀释/封闭液进行稀释以保证zui低本底,所有实验zui好做双份。
5.试剂配制
所有试剂当日配制
5.1 1X 包被液:用蒸馏水稀释浓缩包被液(1ml 浓缩包被液+9ml 蒸馏水)
注意:如果在 10X 中出现结晶,加热到室温或 37℃混匀并再溶解。
棋盘滴定确定试剂的zui佳浓度
1.加 100μl 稀释液到 2~12 列的每孔。
2.加 200μl 稀释的试剂到第yi列的每孔中。
3.从第01 列的孔中取 100μl 转移到第二孔中,混匀用qiang吹吸 3~5 次。
4. 重复步骤 3 向后稀释,一直到第011 列,吸取第011 列 100μl 弃去, 第012 列作为
对照。 重复以上的操作,从 A 排至 G 排, 稀释第二个试剂,H 排作为对照。
7.操作步骤
7.1 杂交瘤筛选
包被液:在 1×包被液中稀释抗原至合适的浓度(一般 1~10μg/ml)。
一抗工作液:含有单克0隆抗0体的培养液。
二抗工作液:取 25μl 的酶标二抗稀释到 5.0 ml 1X BSA 的稀释/封闭液中或更大稀释比例。

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