植物细胞培养
⑴光照:离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格,因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关,而且与细胞分化有关,例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用,所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中,光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质,如medicine的过程,植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。
⑵激1素:
细胞培养
植物细胞培养
⑴光照:离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格,因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关,而且与细胞分化有关,例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用,所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中,光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质,如medicine的过程,植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。
⑵激1素:植物细胞的分裂和生长特别需要植物激1素的调节,促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是基本的激1素。植物细胞的分裂,生长,分化和个体生长周期都有相应的激1素参与调节。和动物细胞相比,植物细胞离体培养对激1素要求的原理已经了解,其应用技术也已相当成熟,已经有一套能使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激1素、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。
营养条件
1.培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质,包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。针对不同细胞的营养需求,有多种合成培养基可供选择,如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。
2.其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外,还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分,如血1清、因子等。
血1清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质,常用的是胎牛血1清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血1清的比例。10%~20%的血1清能维持细胞较快的生长增殖速度,称为生长培养液;为维持细胞缓慢生长或不死,添加2%~5%的血1清即可,称为维持培养液。但血1清中也存在有害于细胞生长和繁殖的物质,如补体、免1疫球蛋白和一些生长抑制因子;成分不明确,影响对结果的分析;不同动物、不同批次的血1清活性差别较大,影响培养效果的稳定性。
谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源,在细胞生长代谢过程中起重要作用,但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解,4℃下放置7天即可分解约50%,故谷氨酰胺需在使用前添加。
iPS细胞
基本概念:
诱导多能iPS细胞(induced pluripotent stem cells, iPS cells )起初是日本人山中申弥( ShinyaYamanaka)于2006年利用病毒载体将四个转录因子(Oct4, Sox2, KIf4和c-Myc)的组合转入分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚胎iPS细胞的一种细胞类型。随后世界各地不同科学家陆续发现其他方法同样也可以制造这种细胞。
细胞可分为全能iPS细胞、多能iPS细胞和单能iPS细胞,诱导多能iPS细胞即通过向体细胞幄入诱.
导基因,使体细胞重编程获得具有胚胎iPS细胞样特性的多能iPS细胞,也称为去分化。
经过了近十多年既漫长又短暂的发展,iPS细胞技术已经取得了举世瞩目的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦,也带来了新的挑战,细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管iPS细胞有着诱人的应用前景,然而,未来iPS细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题:
首先,效率问题。目前,诱导产生iPS细胞的率仍然很低,这与基因导人的方式整合位点、表观遗传学等多种因素有关。这已成为制约iPS从实验室走向临床的zui大瓶颈。因此,如何提高iPS细胞的制备效率仍是人们普遍关注的问题。
第二,安全性问题。现在诱导iPS细胞通常借助逆转录病毒为载体,将几种癌基因转入分化细胞诱导其成为iPS细胞,而这种方法就有可能会因为外源基因插入细胞基因组,干扰了内源基因的表达,从而诱发cancer。
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