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抗l体的层析分离步骤基本

都可以采用标准化的三步曲：步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余DNA，Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，Protein A使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。

理想的连续色谱层析介质

在传统间歇式色谱法中，实验者只能采用单根色谱柱进行分离纯化，上样时只能序列式上样洗脱，这种方法虽然适合于绝大多数分离纯化，但其对于纯化介质的利用率并不高；在新型的连续色谱层析法中，实验者可以同时平行使用多根色谱柱并进行上样和洗脱，整个洗脱过程处于不间断的持续进行中，这种方法可以确保使用更少的缓冲液来i大化填料的利用率，

连续色谱层析简介

众所周知，传统色谱分离技术是采用固定的色谱塔进行，入一定量物料，然后采用洗脱剂不断洗脱，在同一出口在不同时间段就可接到不同的产品组分，此过程明显费时费力；而连续色谱分离技术则是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，

特别适合生产应用，特点包括

·高重复性:适用于任何规模的工艺放大

·高物理、化学稳定性:易于清洗、消毒及再生、介质寿命特长

高动力载量、流速快:缩短生产周期和次数，节省凝胶用量(尤其XL介质，载量可比普通介质高达10倍）

使用调节器( flow adaptor )- 保护柱床的同时更可提高分辨率，节省凝胶

柱子物料须生物兼容，并有尤良的化学抗性
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