小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质,被广泛用于medicine等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成,存在周期长,检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么immune检测技术可以用于定量检测小分子吗?
免1疫检测试剂盒的技术基础就是抗原和抗1体的特异性结合,小分子特异性抗1体的制备即是小分子immune检测试剂盒制备的关键之
DNA标记
小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质,被广泛用于medicine等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成,存在周期长,检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么immune检测技术可以用于定量检测小分子吗?
免1疫检测试剂盒的技术基础就是抗原和抗1体的特异性结合,小分子特异性抗1体的制备即是小分子immune检测试剂盒制备的关键之处。小分子由于分子量小,结构简单,在免1疫学上划归为半抗原(Hapten),即只有immune反应性而没有immune原性的一类物质,不能直接刺激机体产生antibody但是却拥有和antibody结合的特性。随着抗1体制备技术的发展,小分子特异性抗1体的制备技术显得更为多元化
PCR方法已广泛用于科研,在工业中也有不断扩大应用的趋势,它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测细菌污染以及检测残留宿主DNA等。
PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题,尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够,就会发生漏检。另外,PCR所直接面对的样本是DNA,而非病原菌或DNA,因此还需要做DNA抽提,这也是要注意的。
因此,如能采用PCR检测支原体并替代药典方法,还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够,就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章(EP 2.6.7)和《日本药典》第十七版第G3章(JP G3),都规定,对于核酸扩增法(如PCR)检测支原体,如替代传统的培养法,都要求检测限达到10 CFU/ml。
具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品,它一般为冻干粉形式,需要用待测样本的样本基质(需保证里面不含支原体)来复溶,再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带,或者qPCR检测后的Ct值小于40,即表明检测成功。
植物DNA的SDS提取法:1 取2-3g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ml离心管中。2 加入5ml于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30min(摇动数次),使提取液与样品充分混合。3 加入2ml5mol/LKAc,剧烈振荡,冰浴保温20min以上。4 2700×g离心20min,将上清液倒入新的15ml离心管中,(若提取DNA用于Southern等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证DNA纯度)。5 加入4ml氯1仿/异戊1醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×g离心15min。6 在另一新的15ml离心管中加入5ml预冷的异丙1醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30min以上。7 2700×g离心10min,弃去上清液,用4ml70%乙醇洗涤,室温保持10min。2700×g离心3min,倒去上清液。8 重复步骤7,用4ml70%乙醇洗涤,室温保持10min。2700×g离心3min,倒去上清液。超净工作台内吹干(3h左右)。9 加1mlTE缓冲液中溶解,加10μlRNase(10mg/ml),在37℃恒温箱中温育20min。10 再加100μl3mol/LNaAc和2ml无水乙醇,2700×g离心3min,倒去上清液。超净工作台内吹干(3h左右)。11 将DNA沉淀溶于150μlTE中,置于超净工作台内(3h左右)。将TE溶液转入已灭菌的1 5mleppendorf管中,-20℃保存备用。

鼻咽拭子的采集
被采集人员需要 保持头部不动,采样人员去除鼻腔内壁的分泌物。然后采样人员一手轻扶被采集人员头部,一手将鼻咽拭子缓缓插入鼻腔至鼻咽部。在鼻咽部,拭子将停留数秒吸取分泌物,而后采样人员轻轻旋转取出拭子,将样本保存并送检。
咽拭子的采集
被采集人员先用 生理盐水漱口,采样人员将拭子放入无菌生理盐水中湿润。被采集人员头部微仰并保持不动,嘴张大,并发“啊”音,露出两侧咽扁桃体,采集人员将拭子越过舌根,在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次,然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。
需要注意的是,两种采集方法, 被采集人员均会稍感不适,所以在采样的过程中,被采集人员需稍稍克服一下不适感, 配合采样人员的工作。不可过度活动头部,以免拭子划伤粘膜。如被采集人员发生刺激性咳嗽,采集过程需稍作暂停。
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