1、 :操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
间接法1.用包被缓冲液将已知抗
硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒
1、 :操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。

间接法1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;2.次日洗涤3次;3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;6.’后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。

酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

使用贴壁细胞时:① 弃尽培养液,向培养皿中加入650 μl的Solution A,室温静置1分钟。注)96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时,请分数次处理细胞。② 用移液的头吹落贴壁培养细胞,取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。2. 加入400 μl的Solution B,振荡混合。3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。4. 弃去上层有机相,再加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。

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