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作为一种新型的治i疗手段,基因治i疗已进入到临床阶段,目前已受到世界各i国的高度重视。在此过程中,目的基因需要导入到人体,起到治i疗作用。引进人体至受关注的方法是利用载体进行运输。
由于具有安全性好、寄主细胞宽、外源基因在体内表达时间长等特点,腺相关病毒(AAV)被认为是
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作为一种新型的治i疗手段,基因治i疗已进入到临床阶段,目前已受到世界各i国的高度重视。在此过程中,目的基因需要导入到人体,起到治i疗作用。引进人体至受关注的方法是利用载体进行运输。
由于具有安全性好、寄主细胞宽、外源基因在体内表达时间长等特点,腺相关病毒(AAV)被认为是至有前景的基因转移载体之一,在基因治i疗和疫i苗研究中得到广泛应用。
为确保 AAV相关产品的安全性和质量,需要对 AAV衣壳蛋白进行纯度分析。但 AAV载体在开发初期,蛋白质含量极i少,甚至更少,这对研究者的分析工作提出了挑战。
采用SDS-PAGE法对银染法或红宝石染色法进行检测,虽然灵敏度较高,但操作复杂、费时。在毛细管电泳的基础上,发展出一种取代 SDS- PAGE的CE-SDS方法,该方法具有分辨率高、定量准确、重复性好、自动化程度高、速度快等优点。
SCIEX公司利用其多年积累的技术优势,研制了一种基于毛细管电泳的腺相关病毒(AAV)衣壳。
本方法的主要优点:
1、简单明了的样品制备程序
2、VP1, VP2, VP3分辨率极
3、病毒蛋白的CPA%(校正峰面积%)的RSD小于0.7%
4、样品浓度与吸光度的线性关系良好,R2 =0.9991
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一场突如其来的疫情,牵动着亿万人民的心。COVID-19 (COVID-19)是一系列新型冠状病毒引起的相关疾病,已成为广谱抗病毒研究的热点。SCIEX液体联用技术已广泛应用于抗病毒的研究和开发,并有一系列完整的解决方案。
一、发现抗病毒靶点:
根据 SCIEX TripleTOF5600系统(pull-down assay),西班牙加迪斯大学生物医学研究所等,通过 SCIEX ProteinPilot软件鉴定发现 T细胞中的蛋白NOLC1,PP1γ,ILF3,C1QBP可能有助于丙型病毒(Hepatitis C Virus, HCV)核蛋白定位以及 T细胞中细胞核,从而可能成为抗 HCV的潜在靶点。
二、根据已知目标筛选:
利用亲和质谱技术(Affinity Selection Mass Spectrometry),以高通量靶蛋白为基础的配体分子筛选的研究,也是目前新药分子开发的热点领域。上海科技大学水雯垭研究组[2]利用 SCIEXTripleTOF6600系统,利用亲和质谱技术开发出高通量、无标记的配体筛选方法,对 G蛋白偶联受体(GProtein-Coupled Receptors, GPCRs)小分子配体的筛选。
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如何分析光谱图的高i效液相色谱?
实际上色谱图只是简单地说一个横坐标就是时间纵坐标是电信号的二维图谱。
高i效液相色谱法,你可以简单想象一下,固定相是一种多空海绵状的柱形结构,样品从孔中流出。由于各物质吸附能力不同,因此在色谱图上就会出现差异。
有关试验参数:
其保留时间为溶质通过色谱柱的时间。这个特征可以在一种混合物的多个部分中i共享,这也是为什么要使用 MS方法。得到的色谱图显示了强度和保留时间的关系(存在的组分)。
1.保留时间:即可定性的数据参数
若用相同的柱子,相同的流动相,分析相同的样品,则该样品的保留时间,应固定。在不同保存时间的色谱峰上,显示的是不同的物质。若要采用反相色谱法,则色谱峰越远,其对应物质的极性就越小。
2、峰面积:即可量化的数据参数
在滤波后进行峰值检测,其中峰值表示成分或成分的断裂。峰顶可根据覆盖的高度或面积选择。根据已知峰与存在峰的匹配,我们可以用眼睛来识别某些峰。它有助于确定分子的存在,或者分子中有多少原子的存在。
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