细胞增殖检测
本公司应用MTT比色法, 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。去除髓质后将皮质剪成约1-2mm'的碎块,轻碾shen皮质依次通过80。二jia基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定
原代细胞
细胞增殖检测
本公司应用MTT比色法, 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。去除髓质后将皮质剪成约1-2mm'的碎块,轻碾shen皮质依次通过80。二jia基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值,可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏感性测定等。服务内容 1. 细胞接种:收到客户细胞后,我们会用细胞计数板计数细胞,得出细胞悬液浓度。G三质粒系统,将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中,培养48h后,收集上清。计算出应稀释的倍数,按MTT试剂盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液;
2. 细胞培养:然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板,并实时观察细胞状态;
3. yao物处理并呈色:按不同浓度梯度加入yao物作用细胞;
4. 溶解,比色:加入MTT检测试剂,按操作要求孵育相应时间,在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。
透射电镜自噬小体检测
胰酶消化,收集作用后的细胞,离心,先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的PBS溶液中保存在4C中过夜。
再用乙醇梯度脱水,接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定,后用重金属醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色。通过TEM分析凋亡细胞内超微结构变化,拍照保存。
贴壁细胞:先倒出培养液,采用胰蛋白酶消化或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心,100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。结果:约24小时组织块边缘有游离的新生细胞长出,7天即融合成片。管底的细胞团不要打散, 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液,固定约1h-2h. 也可在4C冰箱过夜。
3D细胞培养
3D多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比,3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用,从而更加贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。大鼠主动脉内皮细胞的分离培养方法:分离大鼠主动脉,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞。因此, 3D多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。虽然3D多细胞肿liu球模型具有更显著的实体肿liu生理相关性,但是与2D贴壁细胞培养模型相比,获得大量相对统一的3D多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。
细胞分化
细胞分化是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程,其结果是在空间上细胞产生差异,在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达,通过不同基因表达的开启或关闭,终产生标志性蛋白质。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比,3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用,从而更加贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。细胞诱导是指将一群不同类型或者形态结构、功能特征存在差异的细胞通过生物学、物理学等手段,将之转变为具有相似/相同形态结构、功能特征的细胞群体的过程。
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