腺病毒表达
腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中有效瞬时表达的基因递送平台。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。钟鼎生物采用293A腺病毒包装细胞系（含有腺病毒包装所必需的E1基因序列，是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的），用于高滴度的copy缺陷型（E1和E3缺失）腺病毒的生产，以进行外源基因的表达。
逆转录病毒滴度测定
腺病毒表达
腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中有效瞬时表达的基因递送平台。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。钟鼎生物采用293A腺病毒包装细胞系（含有腺病毒包装所必需的E1基因序列，是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的），用于高滴度的copy缺陷型（E1和E3缺失）腺病毒的生产，以进行外源基因的表达。腺病毒感1染几乎所有的细胞类型，除了一些抗腺病毒感1染的淋巴1瘤细胞。腺病毒是研究原代非增殖细胞基因表达的zui佳系统，它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比；不整合到染色体中，无插入致突变性。能有效进行增殖，滴度高：腺病毒系统可产生108 pfu/ml原液，浓缩后可达1010-1011 VP/ml，这一特点使它非常适用于基因cure。
腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、细菌内重组、位点特异性重组4个发展阶段，同时随着分子生物学技术的发展，改进的体外连接法又得到应用。
体外连接法。这种方法需要全长腺病毒基因组和一个含腺病毒基因组左末端序列的质粒，包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat,ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的基因克1隆到质粒的病毒序列下游，ClaI酶切获得含目的基因的基因组左末端，连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒基因组(ClaI在病毒基因组仅有一个酶切位点，位于E1A基因内部)，将得到的含目的基因的的基因组DNA直接转染包装细胞293，产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒基因组，能够使用的酶切位点仅有一个，连接效率低，而且仅删除了部分E1A基因，外源基因载量有限，所以现已淘汰不用。
真核细胞同源重组法
1994 年，Graham F建立了在293细胞同源重组产生重组腺病毒的方法。这个方法需要2个质粒：骨架质粒含有腺病毒绝大部分基因组序列，但不含有包装信号；穿梭质粒含有ITR、包装信号和目的基因克1隆位点，以及两段与骨架质粒有重叠的序列。将目的基因克1隆到穿梭质粒，与骨架质粒共转染293细胞，由于这两个质粒的部分序列有重叠，能够在细胞内发生同源重组，zui终产生完整的载体基因组，并包装出重组病毒颗粒。该方法曾经被广泛使用，推动了腺病毒载体的发展。由于细胞内重组效率低，某些重组事件还可能产生可copy病毒(RCV)，必需经过噬斑纯化才能获得正确的克1隆化的重组病毒，费时费力，正逐渐被其他方法替代。
基因导入细胞常用方法
转染
重组的噬菌体DNA也可象质粒DNA的方式进入宿主菌，即宿主菌先经过CaCl2，电穿孔等处理成感受态细菌再接受DNA，进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样copy和繁殖，这种方式称为转染（transfection）。M13噬菌体DNA导入大肠杆1菌就常用转染的方法。重组DNA进入宿主细胞也常用转染方式。zui经典的是1973年建立的磷酸钙法，其利用的基本现象是：DNA如以磷酸钙-DNA共沉淀物形式出现时，培养细胞摄取DNA的效率会显著提高。用电穿孔法处理培养的哺乳类细胞也能提高细胞摄取DNA能力，但所用外加电场的强度、电脉冲的长度等条件与处理细菌者都很不相同。用人工脂质膜包裹DNA，形成的脂质体可以通过与细胞膜融合而将DNA导入细胞，方法简单而有效，但缺点是有细胞毒性和血1清的不亲和性，近年来人们发现了一种更为有效的转染试剂－阳离子聚合物，其克服了脂质体转染试剂细胞毒性大，在体内易被血1清清除等缺点，具有转染效率1高，操作简单而日益受到重视。
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