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反相色谱分离纯化后,怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质?
TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除,国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤,其中,离子交换层析效果比较好,还可以起到浓缩样品的作用。
首先,冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和乙
高压制备色谱系统价格
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反相色谱分离纯化后,怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质?
TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除,国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤,其中,离子交换层析效果比较好,还可以起到浓缩样品的作用。
首先,冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和乙腈,药品实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量,只要不超过允许范围,这种办法是很简单、有效的。
其次,如果你的药品的分装量不大的话(<100ug),建议你用离子交换层析,尽量装一个小一点儿的柱子,让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上,稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛,考虑稀释,尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话,可能会形成TFA盐,这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗,然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸,再干燥后形成盐酸盐。
工业制备色谱
蛋白质的特点使得其分离过程与传统化工分离过程有着极为不同的特点:(1)分离对象是具有特定的生物活性的生物大分子产品,分离过程设计中不恰当的物理和化学环境等(如温度、PH值、缓冲液选择、、搅拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白质分子结构发生改变,从而使之失活;(2)由于发酵液、细胞培养液或匀浆液中,我们所需要的目标产物往往存在于含有许多性质十分相似的杂质的稀溶液中,如何从这样一种复杂的稀溶液中经济有效地提取产物是生物分离技术面临的重大课题;(3)从卫生和安全角度出发,对于用基因工程产品,有着极高的纯度和同一性要求,对其中的有害杂质去除率要求极高,对分离设备材质和分离过程中引入的分离介质也有着严格的限制。
气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)
气相色谱(gas chromatography 简称GC)是分离和鉴定低分子量气体或挥发性液体的理想技术,它在工业、农业、、建设、科学研究中都得到了广泛应用。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。高效液相色谱法的原理与气相色谱法的原理相同。但是气相色谱不适用于不挥发物质和对热不稳定物质,而液相色谱却不受样品的挥发性和热稳定性的限制,有些样品因为难以汽化而不能通过柱子,热不稳定的物质受热会发生分解,也不适用于气相色谱法。这使气相色谱法的使用范围受到了限制。
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