试剂准备
1X测定/裂解缓冲液:短暂混合5X储备液,并在去离子水中稀释至1X。 在使用前,添加蛋白酶抑制l剂,例如1 mM PMSF,10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
1.将细胞(一块10厘米长的平板,约107个细胞)培养至约80-90%汇合。根据需要用活化剂或抑制l剂刺激细胞。
2.吸出培养基,并
active rac1 antibody
试剂准备
1X测定/裂解缓冲液:短暂混合5X储备液,并在去离子水中稀释至1X。 在使用前,添加蛋白酶抑制l剂,例如1 mM PMSF,10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
1.将细胞(一块10厘米长的平板,约107个细胞)培养至约80-90%汇合。根据需要用活化剂或抑制l剂刺激细胞。
2.吸出培养基,并用冰冷的PBS洗涤两次。
3.完全除去PBS洗涤液,然后向细胞中加入冰冷的1X分析/裂解缓冲液(每10 cm组织培养板0.5-1 mL)。
4.将培养板放在冰上10-20分钟。
5.用刮板将其从平板上取下。
6.将裂解物转移至适当大小的试管中,并置于冰上。
7.如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。如果发生这种情况,可将裂解液通过27号注l射器针头3-4次以剪切基因组DNA。
8.通过离心10分钟(在4°C下为12,000 x g)清除裂解物。
9.收集上清液并将样品(约1-2 mg的总蛋白)存储在冰上以立即使用,或速冻并存储在-70°C以便将来使用。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往各地。武汉纽斯特生物将携手美国NewEastBio,负责美国NewEastBio产品在市场的推广、销售及售后服务。
测定原理
NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒基于特定于配置的抗Rab35 GTP
单克l隆抗l体,用于测量细胞提取物中或体外的活性Rab35 GTP水平
GTPγS加载Rab35激l活测定。 简而言之,抗活性Rab35小鼠单克l隆抗l体将是
与含有Rab35-GTP的细胞裂解液一起孵育。 绑定的活动Rab35随后将被下拉
蛋白质A / G琼脂糖。 沉淀的活性Rab35将通过免l疫印迹分析使用
抗Rab35兔多克l隆抗l体。
Arl1激l活试验。纯化的GST标记的Arl1蛋白用
抗活性Arl1单克l隆抗l体(Cat。#26924)用GDP(车道1)或GTPγS(车道2)处理后,用抗Arl1单克l隆抗l体(Cat)进行印迹。#26056年)。显示Arl1蛋白输入控制在底部面板中。
产品描述
Arf样蛋白1(Arl1)是调节性gtpase家族中的一员,位于Ras中
GTPases的超家族,在真核生物中具有高度保守的同源基因。Arl1至关重要用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。Arl1在一级序列,细胞位置和功能(膜交通的调节)到Arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络,有报道表明Arl1可能在离子稳态中起作用酵母。
目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP,但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于单克l隆抗l体对其抗原,活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠,重现性一致。
Gα13活化试验。MEF细胞分别用LPA(第2道)或不加LPA(1道)处理。细胞裂解物
用抗活性Gα13单克l隆抗l体(Cat)孵育。#26902)(顶面板)。这