体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5M
Arl1 antibody
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
电泳和转膜
1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。
2. 按照制造商的说明进行SDS-PAGE。
3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到PVDF或硝化纤l维素膜。
免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌）
1. 将PVDF膜浸入甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。
注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。
2. 封闭：用TBST缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%BSA在室温下孵育1H进行封闭，并需要恒定振荡。
3. 孵育一抗：用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA稀释特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的Cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°C条件下过夜孵育。
4. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。
5. 孵育二抗：（例如羊抗兔IgG-HRP），用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。
6. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。
7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ECL显色法。
武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往各地。
产品描述
Arf样蛋白1（Arl1）是调节性gtpase家族中的一员，位于Ras中
GTPases的超家族，在真核生物中具有高度保守的同源基因。Arl1至关重要用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。Arl1在一级序列，细胞位置和功能（膜交通的调节）到Arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络，有报道表明Arl1可能在离子稳态中起作用酵母。
一系列结构多样的配体，从光子到大肽，激l活GPCRs来激发
它们的生理功能。配体结合的GPCRs，反过来，起到鸟呤核苷酸交换的作用Gβγ存在下Gα亚基上的GDP与GTP交换的催化因子，导致Gα亚单位与Gβγ二聚体分离形成两个功能单元（Gα和Gβγ）。Gα和Gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源，G蛋白分为四个家族：Gs，Gi、Gq和G12。增加这些G蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定，生理上G蛋白参与的过程正在增殖。
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