pcr扩增的基本原理
基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然copy过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以
定量PCR试剂
pcr扩增的基本原理
基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然copy过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复1制。
低严格单链特异性引物PCR (Lowstringencysingle specific primer PCR, LSSP- PGR)技术
LSSP - PCR是建立在PCR基础上的又一种新型基因突变检测技术。要求是“二高一低”。高浓度
的单链引物( 5-端/ 3-端引物均可).约4. 8Lmol高浓度的Taq酶( 16Lmol/ 100ml) 低退火温度( 300.所用的模板必须是纯化的DNA部分片段。在这种低严格条件下。引物与模板间发生不同程度的错配。形成多种大小不同的扩增产物。经电泳分离后形成不同的带型。对同一目的基因而言。所形成的带型是固定的。因而称之为“基因标签”。这是一种检测基因突变或进行遗传鉴定的敏感方法。
差示PCR (differential PCR, d -PCR)技术
d-PCR可以定量检测标本靶基因的拷贝数。它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于一个
试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带,比较两条区带的丰度，或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的基因的拷贝数。
定量PCR(quantitative PCR, qPCR)技术
qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量,涉及目的mRNA和内标用
相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用 于研究基因表达。能提供特定DNA基因表达水平的变化.在癌1症、代谢紊乱及自身免1疫性疾病的诊断和分析中很有价值。
PCR技术不仅可用于基础研究，还适用于日常的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究。这些应用要求可靠的性能、及时的灵敏度和严格的标准。因此，所使用的PCR仪和PCR试剂必须符合这些要求和目的。
分子诊断应用包括基因检测、致癌突变检测以及感1染性疾病检测。在法医学中，利用 PCR进行人类身份鉴定是通过对特别的短串联重复序列（STR）进行扩增而区分个体的。在农业学中，PCR在食物病原体检测、育种植物基因分型和 GMO测试中具有重要作用。
（作者： 来源：）
