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液相色谱法概述
液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项、的分析分离技术,是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞
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液相色谱法概述
液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项、的分析分离技术,是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
液相色谱法
液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20% ,而80% 则需用液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、及临床分析,己将该法收载于药典。
液相色谱根据分离机理的不同可分为:
液固吸附色谱
液液分配色谱
离子交换色谱
离子对色谱法
分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)
(一)液-固吸附色谱
流动相为液体,固定相为固体吸附剂,根据物质吸附作用的不同来分离物质。
(二)液-液分配色谱
流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱,是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相,另一种是涂于载体上的固定相。
流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。
流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。
(三)离子交换色谱
(四)离子对色谱法
(五)分子排阻色谱法
液相色谱法可以不做标准曲线吗?
首先要明确做标准曲线的目的,一般是为了含量测定作为标准品来用。液相色谱的浓度和峰面积成正比,样品的含量未知,浓度也就未知,峰面积可读。那么这时需要一个已知含量和已知峰面积的对照品。这个时候做不做标准曲线要看试验方法,有的方法是外标法,也就是和你样品浓度一样的对照品,平行配制两个,进样分析。有的方法是内标法,就需要样品中添加内标物。还有的面积化,那就什么对照都不要进了。方法要看你的质量标准,上面应该有计算方法,上面写的是什么,就按照什么来做。不是非标准曲线不可的。
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