腺病毒分离与鉴定
1.分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物,粪便和尿液等,加抗1生素处理过夜,离心取上清接种敏感细胞(293、Hep-2或HeLa细胞等),37℃孵育后可观察到典型CPE,即细胞变圆、团聚、有拉丝现象,较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。
2.病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒,也
腺病毒滴度测定
腺病毒分离与鉴定
1.分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物,粪便和尿液等,加抗1生素处理过夜,离心取上清接种敏感细胞(293、Hep-2或HeLa细胞等),37℃孵育后可观察到典型CPE,即细胞变圆、团聚、有拉丝现象,较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。
2.病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒,也可用血凝抑制(hemoagglutination inhibition,HI)试验或中和试验(neutralization test)检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理,取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶,孵育1~2天,用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA;PCR可用于腺病毒感1染的诊断,引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列,能检测所有血1清型,而且其敏感性很高,能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻,其检出率可达80%。
腺病毒防治原则
腺病毒的甲醛灭活疫1苗已被用于某些人群的预防,而且将来有被用人二倍体细胞培养的减毒活疫1苗所替代的可能。但因腺病毒对动物具有致癌作用,人们对全病毒疫1苗的作用与安全性存有疑虑。此外加强游泳池和浴池水的消毒,可使水传播性结膜1炎爆发的危险性降至zui小,在作眼的检查时应严格无菌操作,对所用设备充分灭菌,也可控制流行性结膜1炎的发生。对腺病毒感1染的cure仍无有效medicine。
转1基因技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术,在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行基因层次的修饰,出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括: 基因从原有机体转人宿主有机体中,两者的生理的差异对终产物影响而导致的安全性问题。
转移的基因结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的zui小DNA部分片段,由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定,额外的DNA部分片段可能导致基因沉默或终产物的表达不稳定,甚至产生不需要的性状或有毒物质。 基因插人受体基因组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、基因枪法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等,质粒在进人宿主基因组的位置与数量均是不确定的,目的基因的表达量难以预料,同一批的转1基因材料可能存在差异。
转1基因载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识基因可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1基因大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔,虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1基因,但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1基因,其中的3个出现有转1基因向肠道微生物转移的现象,即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。
20世纪40年代以前,对于基因的化学本质并不了解。直到1944年O.T.埃弗里等证实双球菌的转化因子是DNA,才用实验证明了基因是有遗传效应的DNA段。
1955年S.本泽用大肠T4噬菌体作材料,研究溶菌突变型rⅡ的基因精细结构,发现在一个基因内部的许多位点上可以发生突变,并且可以在这些位点之间发生交换,从而说明一个基因是一个功能单位,但并不是一个突变单位和交换单位,因为一个基因可以包括许多突变单位(突变子)和许多重组单位(重组子)(见互补作用)。
1969年J.夏皮罗等从大肠中分离到乳糖操纵子,并且使它在离体条件下进行转录,证实了一个基因可以离开染色体而独立地发挥作用,于是颗粒性的遗传概念更加确立。随着重组DNA技术和核酸的顺序分析技术的发展,对基因的认识又有了新的发展,主要是发现了重叠的基因、断裂的基因和可以移动位置的基因。
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