细胞实验部分设备图片
公司目前拥有多项产品及技术,其中发明两项,软件著作权八项,实用新型三项,商标两件。公司先后获得“江苏省民营科技企业”、“江苏省科技型中小企业”、“江苏省专精特新中小企业”等荣誉资质,连续多年被评为“东南大学大学科技园企业”。电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。2019年公司成为江苏省生物技术协会第七
流式细胞
细胞实验部分设备图片
公司目前拥有多项产品及技术,其中发明两项,软件著作权八项,实用新型三项,商标两件。公司先后获得“江苏省民营科技企业”、“江苏省科技型中小企业”、“江苏省专精特新中小企业”等荣誉资质,连续多年被评为“东南大学大学科技园企业”。电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。2019年公司成为江苏省生物技术协会第七届理事会的特邀理事,成立了“李冬冬工作室”,并获得了南京市“工人先锋号”的荣誉称号。
细胞培养中常见的污染及解决方法
原生动物污染
原生动物污染后,细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下,大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长,但繁殖速度减慢,细胞生长状态不好,边缘不清,变得不透明。结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13。原生动物与细胞形成共生关系。同时,原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍,但以细胞为主,因为原生动物的数量相对较少,因而对细胞的正常生长没有影响,只有当它们达到一定数量时,才终爆发成为循环。
解决方法:原生动物污染的原因有很多,如液体消毒问题、操作问题、环境问题等,如果细胞足够,果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留,需要购买使用相关的灭菌试剂。
细胞转染实验
目的
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。
实验原理
上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法:法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;计算出应稀释的倍数,按MTT试剂盒要求在96孔板内接种相应浓度的细胞悬液。磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒细胞的方法使得其进入细胞。但是由于法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
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