DNA copy主要的特点是半保留copy、半不连续copy。在copy过程中,原来双螺旋的两条链并没有被破坏,它们分成单独的链,每一条旧链作为模板再合成一条新链,这样在新合成的两个DNA分子中,一条链是旧的而另外一条链是新的,因此这种copy方式被称为半保留copy。
DNA的两条链是反向平行的,一条是 5'→3'方向,另一条是 3'→5'方向。在copy起点处,两
AMV反转录酶
DNA copy主要的特点是半保留copy、半不连续copy。在copy过程中,原来双螺旋的两条链并没有被破坏,它们分成单独的链,每一条旧链作为模板再合成一条新链,这样在新合成的两个DNA分子中,一条链是旧的而另外一条链是新的,因此这种copy方式被称为半保留copy。
DNA的两条链是反向平行的,一条是 5'→3'方向,另一条是 3'→5'方向。在copy起点处,两条链解开形成copy泡(replication bubble ), DNA向两侧copy形成两个copy叉(replication fork)。随着DNA的不断解旋,两条链变成单链形式,可以作为模板合成新的互补链。但是,生物细胞内所有的DNA聚合酶都只 能催化 5'→3'延伸。因此,以3 '→5'的链为模板链时,DNA聚合酶可以沿 5'→3'的方向合成互补的新链,这条链称为前导链(leading strand )。当以另一条链为模板时则不能连续合成新链,这条链称为滞后链(lagging strand )。这时,DNA聚合酶从copy叉的位置开始向远离copy叉的方向合成12 kb的新链片段,待copy叉向前移动相应的距离后,又重复这一过程,合成另一个类似大小的新链片段,这些片段被称为冈崎片段(Okazaki fragment)。zui后,由另一种DNA聚合酶和DNA连接酶负责把这些冈崎片段之间的RNA引物除去,并把缺口补平,使冈崎片段连成完整的DNA链。这种前导链的连续copy和滞后链的不连续copy在生物细胞中是普遍存在的,称为DNA的半不连续copy。
DNA copy的引发
所有DNA的 copy都是从固定起始点开始的,而目前已知的DNA聚合酶都只能延长已存在的DNA链,而不能从头合成DNA链,那么一个新DNA的 copy是怎样开始的呢?研究发现,DNA copy时,往往先由引发酶在DNA模板上合成一段RNA引物,再由DNA聚合酶从RNA引物 3'端开始合成新的DNA链。对于前导链来说,这一引发过程比较简单,只要有一段RNA引物,DNA聚合酶就能以此为起点一直合成下去。但对于滞后链来说,引发过程就十分复杂,需要多种蛋白质和酶的协同作用,还牵涉冈崎片段的形成和连接。

cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成,并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶作用合成双链cDNA。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来的基因组DNA相同而且无内含子;相反地,对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上,与外显子序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。
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