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pcr检测心血管系统模型「英瀚斯」

ELISA 是一种结合抗原、抗ti特异性反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。ELISA 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性,酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应,洗涤使固相载体上形成的抗原抗
pcr检测






ELISA 是一种结合抗原、抗ti特异性反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。ELISA 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性,酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应,洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开,再加入酶标记的抗原或抗ti,通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的比例。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚bing烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。加入酶反应的底物,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。






慢病毒包装

1、细胞准备:细胞传到后,密度达到70%左右时进行转染;

2、细胞转染:取两个EP管,一个加入Opti-MEM、质粒和包装质粒;另一个加入Opti-MEM、lipo2000,然后将两管混匀;

3、细胞孵育:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;

4、收集病毒:转染后48h、72h收集含慢病毒的上清;

5、滴度检测:细胞为30%-50%时加入病毒上清液,检测阳性细胞比例。












动物组织细胞基因组DNA提取

操作步骤

1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3),尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中,加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块,转入1.5ml 离心管中,加入蛋白酶K

(500ug/ml)20μl,混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37℃水浴12~24h,间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另

一离心管中。

2.加2倍体积异,倒转混匀后,可以看见丝状物,用100ul 吸头挑出,凉干,用200ul TE 重新溶解。(可进行PCR反应等,需要进一步纯化的按下列步骤进行)

3.加等量的酚振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

4.取上层溶液至另一管,加入等体积的,振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

5. 取上层溶液至另一管,加入1/2体积的7.5mol/L氨加入2倍体积的无水乙醇,混匀后室温沉淀2min ,离心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次,离心12000 rpm , 5min。

8.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物,然后置于4℃或C20℃保存备用。

10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。













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