农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用:过去认为受农bacillus宿主范围限制,农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上,用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米,使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转
腺病毒滴度测定
农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用:过去认为受农
bacillus
宿主范围限制,农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上,用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米,使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转化方法的改进,农bacillus介导的遗传转化不再局限于双子叶植物,在一些单子叶植物如水稻、玉米和小麦等重要的农作物上也相继获得成功。
进入20世纪90年代后,农杆1菌转化法在水稻、玉米等重要的农作物上取得突破性进展。首先是1991年Gould和Shen等利用农bacillus转化玉米茎尖分生组织获得转0基因植株。1998年Lupotto也实现了农bacillus转化玉米的成功,Southern杂交结果显示外源基因能够稳定遗传到下一代。
电1击法
电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”,外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。
1985年Fromm等用electric shock法将pat基因导入了玉米原生质体,得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展,1988年Rhodes等用electric shock法转化玉米原生质体,初步获得了完整的转0基因植株。electric shock法还可以对幼胚、愈伤组织和胚性悬浮细胞系进行遗传转化。1992年D’Hallum K等以玉米幼胚和愈伤组织为受体,用electric shock法导入neo基因,获得了可育的转0基因植株,并且neo基因能稳定地遗传给后代。1993年Sukhapinda等用electric shock法转化从玉米花粉愈伤组织分离的原生质体,将gusA和nptⅡ转入原生质体,获得单倍体转化植株。1994年Laursen等以果胶降解酶处理悬浮细胞系后,通过electric shock法导入bar基因,也获得了可育的转0基因玉米。
电1击法操作简单,不受宿主限制,在遗传转化技术研究的初期得到了较为广泛的应用,但是它的转化效率较低,而且对有壁细胞或组织的转化效果较差。
转1基因技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术,在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行基因层次的修饰,出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括: 基因从原有机体转人宿主有机体中,两者的生理的差异对终产物影响而导致的安全性问题。
转移的基因结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的zui小DNA部分片段,由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定,额外的DNA部分片段可能导致基因沉默或终产物的表达不稳定,甚至产生不需要的性状或有毒物质。 基因插人受体基因组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、基因枪法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等,质粒在进人宿主基因组的位置与数量均是不确定的,目的基因的表达量难以预料,同一批的转1基因材料可能存在差异。
转1基因载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识基因可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1基因大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔,虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1基因,但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1基因,其中的3个出现有转1基因向肠道微生物转移的现象,即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。
(作者: 来源:)