动物细胞培养
高速冷冻离心机在所有的细胞离体培养中,困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。
⑴血1清:动物细胞离体培养常常需要血1清。相对常用的是小牛血1清。血1清提供生长必需因子,如激1素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里,血1清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
⑵支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃,塑料等作为支持物。
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动物细胞培养
高速冷冻离心机在所有的细胞离体培养中,困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。
⑴血1清:动物细胞离体培养常常需要血1清。相对常用的是小牛血1清。血1清提供生长必需因子,如激1素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里,血1清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
⑵支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃,塑料等作为支持物。
⑶气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件。
细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM完全培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。
加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。
细胞冻存
细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。
加入lml冻存液(90%血1清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙1醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。
冻存液的配制:70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

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