ELISA定性测定
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或antibody作出'有'或'无'的简单回答,分别用'阳性'、'阴性'表示。'阳性'表示该标本在该测定系统中有反应。'阴性'则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的zui高稀释度即为滴
分子量marker
ELISA定性测定
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或antibody作出'有'或'无'的简单回答,分别用'阳性'、'阴性'表示。'阳性'表示该标本在该测定系统中有反应。'阴性'则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的高低,可以判断标本反应性的强弱,这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
在间接法和夹心法ELISA中,阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反,阴性孔呈色深于阳性孔。
甘油三酯(TG)检测试剂盒(比色法),#KTB2200:用异丙1醇抽提取TG,KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸,Periodic acid氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与Acetylacetone缩合生成黄色物质,在420 nm有特征吸收峰,其颜色的深浅与TG含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测动物组织、细胞、serum(浆)以及植物样本中甘油三酯(TG)的含量水平;而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。
游离胆固醇(FC)检测试剂盒(比色法),#KTB2210:胆固醇氧化酶催化游离胆固醇(FC)生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500 nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物组织、细胞(细菌)、serum(浆)中游离胆固醇(FC)的含量水平;而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。
PCR产物的回收(胶回收试剂盒)
1.胶回收的目的(1)去除非特异性扩增的产物(2)去除多余的底物(3)去除多余的Taq酶(4)得到目的片段
2.胶回收的过程(1)切胶:紫外下切胶,称重。之后用枪头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片,实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶,且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度,前后多余的部分也尽量切除。
(2)溶胶:每1 mg胶加入1 μL膜结合液(MB),按比例1:1加入MB,55℃水浴溶解。每1~2 min震荡混匀,待溶解后至少在水浴中保持1~2 min,保证胶块完全溶解。在电泳过程中,DNA会与大分子的多糖紧密结合,凝胶的种类和质量不同,DNA与之结合力也不同,只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则,凝胶将与DNA一起沉淀下来,洗脱后将影响回收结果的纯度。(3)结合:将溶胶转移至纯化柱内,12000 rpm离心1 min,倒掉收集管中的废液,将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。
植物DNA的SDS提取法:1 取2-3g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ml离心管中。2 加入5ml于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30min(摇动数次),使提取液与样品充分混合。3 加入2ml5mol/LKAc,剧烈振荡,冰浴保温20min以上。4 2700×g离心20min,将上清液倒入新的15ml离心管中,(若提取DNA用于Southern等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证DNA纯度)。5 加入4ml氯1仿/异戊1醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×g离心15min。6 在另一新的15ml离心管中加入5ml预冷的异丙1醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30min以上。7 2700×g离心10min,弃去上清液,用4ml70%乙醇洗涤,室温保持10min。2700×g离心3min,倒去上清液。8 重复步骤7,用4ml70%乙醇洗涤,室温保持10min。2700×g离心3min,倒去上清液。超净工作台内吹干(3h左右)。9 加1mlTE缓冲液中溶解,加10μlRNase(10mg/ml),在37℃恒温箱中温育20min。10 再加100μl3mol/LNaAc和2ml无水乙醇,2700×g离心3min,倒去上清液。超净工作台内吹干(3h左右)。11 将DNA沉淀溶于150μlTE中,置于超净工作台内(3h左右)。将TE溶液转入已灭菌的1 5mleppendorf管中,-20℃保存备用。

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