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双基因表达载体免费咨询「友名生物」

目前,传统的获得多基因转基yin植株的方法包括共转化,再转化W及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个基因的转化效率是不可控的,每个基因在目标基因组的插入位置也是不一样的,而基因分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化W及杂 交都是耗时的过程。 而为了克服运些缺点,具有单个或者多个转录盒子的多基因载体应运而生并成功 应用于多个研究,但是运些多基因表达载体的应
双基因表达载体








目前,传统的获得多基因转基yin植株的方法包括共转化,再转化W及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个基因的转化效率是不可控的,每个基因在目标基因组的插入位置也是不一样的,而基因分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化W及杂 交都是耗时的过程。

而为了克服运些缺点,具有单个或者多个转录盒子的多基因载体应运而生并成功 应用于多个研究,但是运些多基因表达载体的应用没有得到广泛的推广应用。因为大部分 的方法需要亚克1隆W至于克1隆所耗时间拉长;没有标签或者报告基因与目标基因相连,运 样就导致蛋白或者基因的鉴定比较困难;另外,某些方法如采用同尾酶构建多基因载体的方法受限于可用的酶的数量不多运个问题。所W构建多基因载体需要根据研究目的而设计。





微量凯氏(kjeldahl)定氮法

样品与浓1硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下:

NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3SO2 +4H2O+NH3 (1)

2NH3 +H2 SO4 ――(NH4 )2 SO4 (2)

(NH4 )2 SO4 +2NaOH――2H2 O+Na2 SO4 +2NH3 (3)

反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量,如欲求得样品中蛋白含量,应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。





蛋白质测定试剂

(1)标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血1清清蛋白(bsa)或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血1清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用0.05NaOH配制。

(2)双缩脲试剂:称以1.50克硫酸铜(CuSO45H2O)和6.0克酒石酸钾钠(KNaC4H4O64H2O),用500毫升水溶解,在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液,用水稀释到1升,贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制。





原子数由m个氨基酸,n条肽链组成的蛋白质分子,至少含有n个—COOH,至少含有n个—NH2,肽键m-n个,O原子m+n个。分子质量设氨基酸的平均相对分子质量为a,含b个二硫键,蛋白质的相对分子质量=ma-18(m-n)-2b基因控制基因中的核苷酸 6信使RNA中的核苷酸 3蛋白质中氨基酸 1。蛋白质是由C(碳)、H(氢)、O(氧)、N(氮)组成,一般蛋白质可能还会含有P(磷)、S(硫)、Fe(铁)、Zn(锌)、Cu(铜)、B(硼)、Mn(锰)、I(碘)、Mo(钼)等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为:碳50% 氢7% 氧23% 氮16% 硫0~3% 其他微量。

(1)一切蛋白质都含氮元素,且各种蛋白质的含氮量很接近,均为16%;

(2)蛋白质系数:任何生物样品中每1g元氮的存在,就表示大约有100/16=6.25g蛋白质的存在, 6.25常称为蛋白质常数。






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